如何选择BTX转基因仪如何选择BTX转基因仪.docVIP

如何选择BTX转基因仪（电转仪）1、确定目标对象：也就是你所有转的目的物是什么东西？细胞类型包括人类、哺乳动物、细菌、植物、藻类、霉菌、寄生虫等细胞系包括CHO, COS, Jurkat, Saccharomyces Tobacco, Corn, Rice, Tomato，Trypanosome，E coli等2、其次确定目的目的包括：转染 转化 电整合 电插入 活体/卵的应用 核移植和克隆 细胞融合然后根据这些来确定该选择什么类型的仪器1、 某位老师使用化学法转化大肠杆菌E.coli。他希望构建cDNA文库，但是不能得到好的转化效率。他以后还想做哺乳动物细胞。如何来选择仪器：选择方案：ECM 399将是较好的选择，这仪器用来转化E.coli效果十分理想，同时操作简单。如果有足够的预算，可以选择ECM 630, 这样更符合他现在和将来的需求。 2、某位老师想要进行一些鸡胚的研究工作，他们希望转染鸡的眼睛，以便研究视觉膜的发育过程。他对卵的基因传递有一些了解。选择方案：完成这个转染过程需要 ECM 830和活体电极Genetrodes。由于目标区域很小，他需要小的长的genetrode。方波适合动物体的活体转基因，同时针形的电极是卵的转基因的首选。3、遗传研究中心希望开展某种疾病的基因治疗，首先从小动物例如小鼠，以后要在狗、猪等动物体开展。客户最初希望用基因枪的方法。但是觉得条件不易控制。选择方案：基因枪不是理想的活体转基因的方法。基因枪容易伤害哺乳动物的组织，同时条件可控性差，DNA的转移效果不理想。推荐使用ECM 830 和2 Needle Array 用于小动物研究，对于大的动物研究的话还需配 caliper electrode。4、Dr. Mendle使用agrobacteria来转化烟草的原生质体。他在寻找快速在完整的植株上完成转基因的方法。此时如何选择？选择方案:ECM 630和特殊电极。电极的选择需要根据植物转基因的部位。一般有三种电极可以选择Tweezertrode、 Caliper Electrode、 Needle Arrays.根据他所转的植物体大小，硬度等进行5、Dr. Hofmann正使用脂质体方法转染原代神经细胞，但是结果差强人意，仅得到1%的转染效率。但是他不希望使用电转，因为怕杀死细胞。这些希望不能被胰蛋白酶消化（会引起其他变化）所以他不能使用样品杯。给怎么办。选择方案：推荐使用ECM 830 和petri dish 电极或者epizap电极。这样可以用最温和的方法完成原位转基因。6、 Dr. Bloom希望你给他推荐一款融合仪。他过去使用化学的方法来进行的。怎么来推荐。选择方案：如果费用允许， ECM 2001是最好的选择。它提供交流波能排列细胞，可以完成所有的细胞融合试验。如果费用不足的话，ECM830也可以完成核移植的工作，在融合时需要将两个细胞进行排列，或者细胞的浓度足够大。以下是工作目的和相应的最佳仪器对照说明：·细菌/酵母转化 （系统：ECM399/630）电穿孔现在被认作是转化细菌及酵母的最有效的方法。革兰氏阴性细菌（例如大肠杆菌）一般比革兰氏阳性细菌更容易转化，因为他们的细胞壁组成不同。对于革兰氏阴性细菌常常可以获得10的10次方转化2/微克DNA的转化效率，而对于革兰氏阳性细菌，一般可以得到10的6次方转化2/微克DNA。Chang等人（1997）成功对一个mtz-敏感的Heliobacter pylori菌株进行电穿孔以传递mtz抵抗性。Planelles等人（1999）使用电穿孔转化大肠杆菌，以避免使用包装物质。最近电穿孔仪器方面的进展将使研究人员能够进一步优化细菌转化（例如脉冲长度产生方面扩展的功能条件）。RNA、DNA、蛋白质以及小分子都已经通过电穿孔的方法转入酵母。没有必要在电穿孔前部分去除酵母细胞壁，因为在完整酵母电穿孔方面的进展可以产生高的转化率。Faber等人（1994）年优化了S.Cerevisiae的实验方案，使用Hansenula Polymorpha获得了比以前的报告增加300倍的转化效率。在质粒修复中，质粒从酵母转入大肠杆菌以进行详细的DNA序列分析，这是另外一种重要的技术。这种两个步骤的过程被电穿孔进行了简化，用于验证隐性基因的结构，将其导入酵母，看基因性和表现性之间的关系。已经建立了标准的实验方案使用指数衰减波发生器例如BTX ECM630转化细菌/酵母。使用方形波电穿孔仪的实验方案，例如BTX ECM830，来转化细菌/酵母。研究人员还成功将大的质粒（BAC及YAC）导入细菌。电穿孔杯是细胞及酵母电穿孔的最常用附件，而Model747共轴电极使用则变得越来越普遍。·动物细胞转染 （系统：ECM630/830）对真核细胞的转染可以通过多种方法获