方法学考察PPT-1.6.ppt

测定数据的精度要求 一般应满足以下规定 回收率（%） 95～105％ 相对标准偏差（RSD%） TLCS＜5%，HPLC/GC＜3% * 胃灵颗粒质量标准研究—加样回收试验： * 编号 取样量(g) 样品中芍药苷含量(μg) 对照品添加量 (μg) 测定量(μg) 回收率(%) RSD% 1 0.5014 155.9 121.2 275.6 98.73 101.15±2.07 2.05 2 0.5001 155.8 121.2 279.9 102.60 3 0.5105 156.2 121.2 284.8 103.96 4 0.5198 156.2 151.5 316.0 101.86 5 0.5078 156.4 151.5 315.6 104.11 6 0.5156 157.2 151.5 310.3 98.96 7 0.5163 156.2 181.8 343.6 100.67 8 0.5224 156.2 181.8 343.2 99.42 9 0.5044 157.0 181.8 338.7 100.02 取1g白芍含量为0.3110mg·g-1的胃灵颗粒（批粉末9份， 分别加入芍药苷101μg·ml-1的对照品1.2ml、1.5ml和1.8ml。按照供试品溶 液的制备方法分别制成低、中、高三个浓度的供试品各3份，依法进行含 量测定，计算加样回收率和RSD。结果见下表。 * * * 中药质量标准方法学验证  主讲人：孙启慧 1. 中药质量标准方法学验证的意义？ 2. 中药质量标准方法学验证的主要内 容及方法？ * * 方法学验证的目的 Ⅰ 方法学验证：是对测定方法的评价,是建立新方法的研究 内容和依据。 Ⅱ 证明采用的方法是否适合于相应的检测方法或分析要求； Ⅲ 新建立的检测方法、改变原检测方法、工艺变更、处方变更 等均须验证。 * 需验证的分析方法类型 鉴别（薄层鉴别） 限量检查（重金属含量限度检查） 含量测定 溶出度、释放度 残留物（农药残留）、添加物（食品添加剂）等的限度检查 * 需验证的分析方法内容 ①已有重现性验证，不需验证中间精密度。②重现性只有在该分析方法将被法定标准采用时做。③如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。 专属性 线性 检测限、定量限 精密度（重复性、中间精密度、重现性） 稳定性 准确性（回收率） 耐用性 * * 专属性（Specificity） 专属性定义:专属性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。 鉴别：确证被测物是否符合其特性； 检查：确保采用的分析方法可检出被测物中杂质或应控制物的准确含量，如有关物质、有毒成分、重金属、溶剂残留量等； 含量测定：提供样品中被测物含量的准确结果。 * 专属性 常用的试验方法 空白阴性对照试验 比较同一分析系统对照品与供试品相应色谱峰的吸收光谱的一致性 * 专属性 空白阴性对照试验的试验要求： TLC：目测观察，空白阴性对照应不得显与供试品检测成分相应的斑点。 HPLC/GC/TLCS：空白阴性对照色谱中，在与相应对照品保留时间相应的位置应无色谱峰或其峰面积小于5% 胃灵颗粒质量标准研究—专属性 * 图 芍药苷含量测定HPLC色谱图 a 芍药苷对照品；b供试品；c白芍阴性对照品；1.芍药苷 * 线性关系考察（Linearity） 线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度（质量）直接呈正比关系的程度。 * 线性试验方法： 制备梯度浓度对照品溶液，以相同体积进样测定峰面积值，制备标准曲线，并以峰面积值与对照品浓度（或量）作线性回归，计算线性方程和相关系数； 制备同一浓度的对照品溶液，以不同体积进样测定，同法处理； 线性测定的浓度应尽量在一较宽的范围，一般使待测成分峰面积处于标准曲线的中间浓度左右为宜； 计算相关系数，要求： TLCS：R＞0.99，HPLC-UV：R＞0.999，HPLC-ELSD：R＞0.995 * 胃灵颗粒质量标准研究—线性关系考察： 进样量（μg） 0.1515 0.303 0.606 0.909 1.212 峰面积 134.9 269.3 539.4 809.9 1080.4 表 芍药苷线性范围 图 芍药苷标准曲线 * 范围： 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 考察的区间应尽可能覆盖日后样品可能的含