微生物菌体大小及菌群数量的测定.docxVIP

霉菌的形态观察一．实验目的1．掌握配制合成马铃薯培养基的一般方法。2．学习并掌握观察霉菌形态观察法——小室培养。3．了解并掌握青霉、根霉、毛霉、黑曲霉四种霉菌的形态结构。二．实验器材1．菌种：青霉、根霉、毛霉、黑曲霉 。 2．试剂：马铃薯、葡萄糖、琼脂、水、 氢氧化钠、盐酸、蒸馏水、20%甘油3．仪器或其他用具：显微镜、载玻片、酒精灯、接种环、盖玻片、平皿、 U型管、滤纸、解剖刀、吸管、镊子三．实验原理 1.霉菌：霉菌是形成分枝菌丝的真菌的统称，在固体基质上生长时，部分菌丝深入基质吸收养料，称为基质菌丝或营养菌丝；向空中伸展的称气生菌丝，可进一步发育为繁殖菌丝，产生孢子。大量菌丝交织成绒毛状、絮状或网状等，称为菌丝体。菌丝体常呈白色、褐色、灰色，或呈鲜艳的颜色（菌落为白色毛状的是毛霉，绿色的为青霉,黄色的为黄曲霉），有的可产生色素使基质着色。 2.根霉：根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝的包囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。根霉除了有无性生殖外还有有性生殖，即产生接合孢子进行接合生殖。3.毛霉：菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能广泛蔓延，无假根或匍匐菌丝。不产生定形淡黄色菌落。菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，内有形状各异的囊轴，但无囊托。囊内产大量球形、椭圆形、壁薄、光滑的孢囊孢子。孢子成熟后孢子囊即破裂并释放孢子。有性生殖借异宗配合或同宗配合，形成一个接合孢子。某些种产生厚垣孢子。毛霉菌丝初期白色，后灰白色至黑色，这说明孢子囊大量成熟。4.黑曲霉：菌落呈黑褐色，顶囊大球形，小梗双层，分生孢子为球形，呈黑、黑褐色，平滑或粗糙。菌丝发达，多分枝，有隔，有多核的多细胞真菌。分生孢子梗由特化了的厚壁而膨大的菌丝细胞（足细胞）上垂直生出，顶端膨大成球状，在其表面可辐射状生出一层或二层分生小梗，小梗顶端一串串分生孢子，分生孢子头状如“菊花”。黑曲霉的菌丝、孢子头常呈现各种颜色，如：黑、棕、绿、黄、橙、褐等，菌种不同，颜色也不同。 5.青霉：青霉菌属多细胞，营养菌丝体无色、淡色或具鲜明颜色。菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。分生孢子球形、椭圆形或短柱形，光滑或粗糙，大部分生长时呈蓝绿色。有少数种产生闭囊壳，内形成子囊和子囊孢子，亦有少数菌种产生菌核。 6.霉菌的菌丝比细菌及放线菌粗几倍至几十倍，可以采用直接制片法或透明胶带法或载玻片培养观察法来观察霉菌，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。 四．实验步骤1. 培养小室的准备：在平皿底铺一张圆形滤纸片，再放一Ｕ型管，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，准备四套上述平皿，再准备两套空平皿，把这六套平皿包扎在一起，再用牛皮纸包扎两个2ml的吸管，在100ml锥形瓶中盛放30ml20%的甘油，用牛皮纸包扎，然后将平皿、吸管和甘油放于高压灭菌锅内，于110℃灭菌20～30分钟。2．配置马铃薯培养基100ml:按照马铃薯培养基的配方取适量的（即20g已去皮的马铃薯，切成块煮沸20min,然后先用一层纱布过滤，再用六层纱布过滤，再加糖和琼脂，溶化后补水至100ml,121℃灭菌30min.3 .琼脂薄片的制作：取已灭菌的马铃薯琼脂培养基约5ml 注入已灭菌的培养皿中，使之凝固成薄层。事先用记号笔在平皿底部划分好1cm x1cm的方块，把解剖刀在酒精灯中浸泡后灼烧，在酒精灯下用解剖刀切成1cm x 1cm的琼脂块，在无菌操作台上将其移至上述培养室中的载玻片上（每片放两块 )。 4．接种 ： 在无菌操作台上，用接种环从斜面培养物上挑取很少量的菌种，接种于培养小室中琼脂块的某一边缘上，并在培养皿的外侧贴好标签，标签上注明菌名、组别和接种日期。5.加盖玻片：用已灭菌的镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。6倒保湿剂?：每个培养皿中倒2mL?20%的无菌甘油，使皿内的滤纸完全润湿，以保持皿内湿度，盖上培养皿皿盖 。 7.培养：将平板倒置，于27℃培养一星期。 8.镜检： 取出载玻片置低倍镜下观察，注意观察菌丝有无隔膜，有无假根、足细胞等特殊形态的菌丝。注意其无性繁殖器官的形状和构造，孢子着生 的方式和孢子的形态、大小等。五、实验结果 项目菌种 特征 代表特征 根霉菌丝无隔、多核、分枝状，有匍匐菌丝和假根。在假根的上方直立地生长出一至