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关于“DAD秘籍”二极管阵列检测器目前已在高效液相色谱分析中大量使用，一般认为是液相色谱最有发展、最好的检测器。随着DAD检测器的普及，我们很多客户反馈在使用DAD的过程中有些许疑惑，于是小桂版的DAD秘籍应运而生，帮助用户无忧修炼 :)?要进入正题了，好激动?=￣ω￣=1明表象四张图分清紫外检测器（UVD）和二极管阵列检测器（DAD）?外观差不多：?原理有不同:一句话概括：紫外检测器先分光，取得单色光再通过流通池，用光电二极管检测，只能获得特定波长的信号；二极管阵列检测器复色光先通过流通池，再分光，整个光谱由二极管阵列检测，同时获得一段光谱范围内信号。?功能有差异：?DAD谱图更丰富：?DAD是大势所趋?一般情况下，二极管阵列检测器可以完全替代紫外检测器。同时因为DAD可以获取更多的数据信息，用于辅助定性和光谱检索，因此DAD的使用会越来越普遍。?2知用法?DAD再牛，也要会使用。相对紫外检测器，DAD的设置和参数优化会更多一些，对使用者的要求也高一些。不过不用怕，只要掌握了下面的秘籍，你也可以轻松玩转DAD。??有硬件就要有软件，DAD全部由工作站来控制。下面就以RIGOL UltraChrom?和安捷伦 Chemstation为例，看看工作站方法设置。（实验方法是药典、标准等既定方法规定的，按照方法中的要求设定方法。）?1. 下面来看看?RIGOL?Ultrachrom 工作站方法设置:?这个方法，用紫外检测器得跑三遍，但用DAD可以一次搞定，如何设置，看下图：?2. 再来看看?安捷伦Chemstation工作站方法设置：??【插播】DAD?方法中参数说明：【一般情况下】样品波长：按照方法要求选择检测波长，可以参考下文中的详细说明。?样品带宽：主要影响峰高和基线噪音，因此优化带宽可以获得最佳信噪比；样品带宽选择的最直接依据是其吸收光谱中峰的峰宽，详见后面的解释。4nm是比较通用的样品带宽。?参比波长：选择合适的参比波长可以减小梯度洗脱过程中的基线漂移，甚至可以通过优化参比波长对共流出峰（没分开的峰）做分别检测。一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域，请参考下文详细说明。?参比带宽：是参比波长取值的波长范围，影响参比波长设置的实际效果。参比带宽至少要与样品波长的带宽相等，许多情况下选择100nm作为缺省值，如果在不想用参比波长的情况下，也可以直接将带宽设置为0（或去掉参比波长前面的勾，如Agilent仪器）。?波长范围：是工作站采集3D光谱数据的波长范围。一般按照方法要求，没有要求则需要包含所有被测物质的检测波长，但是较宽的波长范围采集会占用更多的磁盘空间。?步进:?一般选择1nm，步进的选择对谱带数据点数有影响。?采样率/峰宽：采样率和峰宽是同一目的的两种不同实现方式，其目的都是为了真实的采集到一个色谱峰。一般选择10Hz。采样率高能更真实的还原峰型，但会带来更大的基线噪音。反之过低的采样率会导致峰变形，但基线噪声更小。选择合适的采样率以获得最佳的信噪比。?曝光时间：这是RIGOL L-3520 DAD的一项高级参数设置，一般选择20ms滤波设置:?这是RIGOL L-3520 DAD的一项高级参数设置，快/正常/慢/无，一般选择正常?要弄明白一般为什么这样设置，请您接着看每个参数的意义~?3懂原理1.??样品和参比波长及带宽简单说：你看到的色谱图上的最终吸光度值是这么来的：?吸光度=以样品波长为中心在样品带宽范围内的所有波长吸光度平均值-以参比波长为中心在参比带宽范围内的所有波长吸光度平均值这个吸光度是实时计算的，你看到的色谱图中的每一个点，都是这个公式计算来的。（当然如果关闭了参比波长，就没有后半截了）?晕了吧？?打个比方，检测器方法中的信号 A 设置为样品 254.0/4、参比360.0/100，即从 252到 256 nm 波长范围内的平均吸光度减去从 310 到 410 nm 波长范围内的平均吸光度。有什么用？想一想，我们在走梯度，流动相的组成时时变化，导致基线漂移，大家应该经常遇到。为啥会这样？主要因为流动相变化时：（1）流动相组成变化导致背景吸收变化（尤其是检测波长比较短的时候，如203nm）；（2）流动相组成变化导致折光系数改变（这个是流通池里面光折射的物理的影响）。现在回顾下上面的公式，其实：吸光度=(样品吸收+背景吸收)-(参比吸收+背景吸收)如果我们把参比波长选在一个样品没吸收的地方，则：吸光度=(样品吸收+背景吸收)-(0+背景吸收)换句话说，背景变化被扣掉了所以基线不飘了！就像下面这样：（此图片来源于Agilent用户手册）所以，小伙伴们，用DAD时，正确选择参比波长，是纠正基线漂移的法宝。?还有，一般参比带宽都选的那么宽，为啥？因为，带宽越宽，被平均的数据点越多，偶然性变化带来的影响越低，