医学细胞生物学第09章核糖体分析报告.ppt

第九章 核糖体(ribosome) ?核糖体的类型与结构 ?多聚核糖体与蛋白质的合成 第一节 核糖体的类型与结构 核糖体是合成蛋白质的细胞器，其唯一的 功能是按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确 地合成多肽链。 ?核糖体的基本类型与成分 ?核糖体的结构 ?核糖体蛋白质与rRNA的功能分析 一、核糖体的基本类型与成分 ?核糖核蛋白体,简称核糖体(ribosome) ?基本类型 ?附着核糖体 ?游离核糖体 ?70S的核糖体 ?80S的核糖体 ?主要成分 ?r蛋白质：40%，核糖体表面 ?rRNA:60%,，核糖体内部 二、核糖体的结构 ?结构与功能的分析方法 ?蛋白质合成过程中很多重要步骤 与50S核糖体大亚单位相关 结构与功能的分析方法 ?离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； ?纯化的r蛋白与纯化的rRNA进行核糖体的重组装， 显示核糖体中r蛋白与rRNA的结构关系 ?双向电泳技术可显示出E.coli核糖体在装配各阶段中， 与rRNA结合的蛋白质的类型 ?双功能的交联剂和双向电泳分离可用于研究r蛋白在 结构上的相互关系 ?电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在核糖 体的亚单位上的定位。 ?对rRNA，特别是对16S rRNA结构的研究 ?70S核糖体的小亚单位中rRNA与全部的r蛋白关系 的空间模型 ?同一生物中不同种类的r蛋白的一级结构 均不相同，在免疫学上几乎没有同源性。 ?不同生物同一种类r蛋白之间具有很高 的同源性， 并在进化上非常保守。 ?蛋白质结合到rRNA上具有先后层次性。 ?核糖体的重组装是自我装配过程 ?16SrRNA的一级结构是非常保守的 ?16SrRNA的二级结构具有更高的保守性： 臂环结构(stem-loop structure) ?rRNA臂环结构的三级结构模型 蛋白质合成过程中很多重要步骤与50S核糖体大亚单位相关 ?涉及的多数因子为G蛋白(具有GTPase活性)，核糖体上 与之相关位点称为GTPase相关位点。 ?最近人们成功地制备L11-rRNA复合物的晶体，获得了 其空间结构高分辨率的三维图象。 ?这一结果证实了前人用各种实验技术所获得的种种结论 ?提出直观、可靠且比人们的预料更为精巧复杂和可能的 作用机制，从而为揭开核糖体这一具有30多亿年历史的 古老的高度复杂的分子机器的运转奥秘迈出了极重要的 一步。 三、核糖体蛋白质与rRNA的功能分析 ?核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点 ?在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点 ?与mRNA的结合位点 ?与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点——氨酰基位点，又称A位点 ?与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点——肽酰基位点，又称P位点 ?肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点——E位点(exit site) ?与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶 (即延伸因子EF-G)的结合位点 ?肽酰转移酶的催化位点 ?与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和 终止因子的结合位点 在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 ?核糖体蛋白 ?在核糖体中rRNA是起主要作用的结构成分 ?r蛋白质的主要功能 核糖体蛋白 ?很难确定哪一种蛋白具有催化功能： 在E.coli中核糖体蛋白突变甚至缺失对蛋白 质合成并没有表现出“全”或“无”的影响。 ?多数抗蛋白质合成抑制剂的突变株，并非由 于r蛋白的基因突变而往往是 rRNA基因突变。 ?在整个进化过程中rRNA的结构比核糖体蛋白 的结构具有更高的保守性。 在核糖体中rRNA是起主要作用的结构成分 ?具有肽酰转移酶的活性； ?为tRNA提供结合位点(A位点、P位点和E位点)； ?为多种蛋白质合成因子提供结合位点； ?在蛋白质合成起始时参与同mRNA选择性地结 合以及在肽链的延伸中与mRNA结合； ?核糖体大小亚单位的结合、校正阅读(proofreading)、 无意义链或框架漂移的校正、以及抗菌素的作用等 都与rRNA有关。 r蛋白质的主要功能 ?对rRNA 折叠成有功能的三维结构是十分重要的； ?在蛋白质合成中, 某些r蛋白可能对核糖体的构象 起“微调”作用； ?在核糖体的结合位点上甚至可能在催化作用中, 核 糖体蛋白与rRNA共同行