基因工程的基本操作程序最终教案分析.ppt

3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法：感受态细胞法（Ca2+处理法） 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 四、目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 （一）、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: 归纳步骤 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 P15思考与探究 4、个体生物学水平鉴定 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA 归纳步骤 归纳: 基因工程的基本操作程序 1、获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 2、构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 3、将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法、感受态细胞法 4、目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定：个体水平的鉴定 练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA连接酶作用于 处。（填“a”或“b”） a a 练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术的核心是 和 。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 答案：（1）a a （2）基因枪法（花粉管通道法） （3）植物组织培养（1分） 脱分化（去分化） 再分化 （4）耐盐基因（目的基因） 一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中） 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞----农杆菌转化法 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 提纯基因表达载体 体外显微注射入受精卵 受精卵移植 新性状动物 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 3.将目的基因导入微生物细胞 Ca2+处理 细菌 感受态细胞（细胞通透性增大） 一定温度 感受态细胞吸收重组DNA分子 目的基因随受体细胞繁殖而复制 四、目的基因的检测与鉴定 检测— 鉴定—— ①检测目的基因是否整合到受体生物的染色体DNA上 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 DNA分子杂交（DNA与DNA） 分子杂交(DNA与RNA)（注意与上不同之处） 抗原—抗体杂交(蛋白质与蛋白质) 1．基因工程的正确操作步骤是(　　) ①使目的基因与载体相结合 ②将目的基因导入受体细胞 ③验证目的基因的表达是否符合特定性状要求 ④提取目的基因 A．③②④①　 B．②④①③ C．④①②③ D．③④①② C 2．下列获取目的基因的方法中需要模板的是(　　) ①从基因文库中获取目的基因　②利用PCR技术扩增目的基因　③反转录法　④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成DNA A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ D 3．聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速