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乳酸菌检验操作规范培训 质量管理部 目录 一、乳酸菌 二、仪器设备 三、 培养基 四、无菌室准备 五、接种培养 六、菌落计数 七、乳酸菌在改良MC培养基上菌落特征 八、过氧化氢酶试验 一、乳酸菌 1、乳酸菌的概念 乳酸菌一词并非生物分类学名词，而是指能够利用发酵性糖类产生大量乳酸的一类微生物的统称。 通常将乳酸细菌之类群称为乳酸菌。 2、乳酸菌主要分布 乳杆菌属（Lactobacillus） 链球菌属（Streptococcus） 明串珠菌属（Leuconostoc） 片球菌属（Pediococcus） 双歧杆菌属（Bifidobacterium） （一）乳杆菌属（Lactobacillus） 1．乳杆菌属的形态特征 细胞呈杆状，多为长杆状、短杆状及棒杆状，一般成短链排列。革兰氏染色阳性，通常不运动，无芽孢。 2．乳杆菌属的生物学特点 化能异养型，营养要求严格，生长繁殖需要多种氨基酸、维生素、肽、核酸衍生物。 厌氧、耐氧性厌氧或兼性厌氧 生长最适pH为5.5～6.2，在pH≤5的环境中可生长，而中性或初始碱性条件下生长速率降低。 生长温度范围，2～53℃，最适生长温度30～40℃。 3．乳杆菌属的代表种 3.1保加利亚乳杆菌（L.bulgaricus） 细胞形态长杆状，两端钝圆。 固体培养基生长的菌落呈棉花状，易与其它乳酸菌区别。 能利用葡萄糖、果糖、乳糖进行同型乳酸发酵产生D－型乳酸（有酸涩味，适口性差），不能利用蔗糖。 3.2嗜酸乳杆菌（L.acidophilus） 细胞形态比保加利亚乳杆菌小，呈细长杆状，能利用葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖进行同型乳酸发酵产生乳酸。 最适生长温度37℃，20℃以下不生长，耐热性差。蛋白质分解力较弱。 （二）链球菌属（Streptococcus） 1．链球菌属的形态特征 细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列。革兰氏染色阳性，无芽孢，一般不运动，不产生色素。 2．链球菌属的生物学特点 化能异养型，同型乳酸发酵产生右旋乳酸；兼性厌氧型，接触酶反应阴性，厌氧培养生长良好。 3．链球菌属的代表种 嗜热链球菌（St.thermophilus） 细胞形态呈链球状。 能利用葡萄糖、果糖、乳糖和蔗糖进行发酵产生乳酸 。 （三）明串珠菌属（Leuconostoc） 菌落一般小于1.0mm，光滑、圆形、灰白色 细胞球形或豆状，成对或成链排列 。 革兰氏染色阳性，不运动，无芽孢。 （四）双歧杆菌属（Bifidobacterium） 1．双歧杆菌属的形态特征 细胞呈多样形态：Y字型、V字型、弯曲状、勺型，典型形态为分叉杆菌 革兰氏染色阳性，亚甲基兰染色菌体着色不规则。无芽孢和鞭毛，不运动。 2．双歧杆菌属的生物学特点 化能异养型，对营养要求苛刻，生长繁殖需要多种双歧因子 。 能利用葡萄糖、果糖、乳糖和半乳糖，生成乳酸和乙酸及少量的甲酸和琥珀酸。 蛋白质分解力微弱。 3、代表种 人体肠道中共有8种，其中数量最多的5种为： 两歧双歧杆菌（B.bifidum） 婴儿双歧杆菌（B.infantis） 青春双歧杆菌（B.adolescentis） 长双歧杆菌（B.longum） 短双歧杆菌(B.breve) 4、双歧杆菌功能 是人体肠道有益菌群，它可定殖在宿主的肠粘膜上形成生物学屏障 具有拮抗致病菌、改善微生态平衡、合成多种微生素、提供营养、抗肿瘤、降低内毒素、提高免疫力、保护造血器官、降低胆固醇水平等重要生理功能，其促进人体健康的有益作用，远远超过其它乳酸菌。 二、检测仪器设备 冰箱：0～4℃ 恒温培养箱：36±1℃ 恒温水浴锅：46±1℃ 微生物显微镜 架盘药物天平：0g～500g，精确至0.5g 三角瓶：500ml 灭菌刻度吸管：1ml、10ml 灭菌平皿：直径90mm 三、 培养基 1、改良MC培养基 成分：大豆蛋白胨，5g；牛肉浸膏，5g;酵母浸膏，5g；葡萄糖，20g；乳糖， 20g；碳酸钙， 10g；琼脂，15g；蒸馏水，1000mL；1％的中性红溶液，5mL；硫酸多粘菌素B，10万IU。 115℃15分钟高压灭菌备用。 2、培养基的准备 使用前，将灭菌培养基用微波炉或水浴锅加热溶解，在40~45℃水浴中保温待用。 四、无菌室准备 无菌室使用前后，用紫外灯照射30～40min。将工作服、工作帽和工作鞋放入无菌室进行灭菌，进入无菌室前换上工作服、工作帽和工作鞋。 五、接种培养 以无菌操作，用1ml灭菌刻度吸管吸取1ml样品原液，注入含有灭菌生理盐水的试管内，充分振摇，制成1:10的稀释液。 注意：刻度吸管尖端不要触及试管内生理盐水。 接种培养操作录像检测\乳酸菌检测.MPG 讨论 录像中存在细节问题： 1、拿平板前先消毒手 2、倒