[分子生物学实验方法-2分子生物学.pptVIP

缺点 细菌缺乏翻译后修饰系统，真核蛋白不能得到适当地折叠和翻译后修饰，使得该系统筛选到生理作用蛋白的可能性降低。 结构域的引入对目标蛋白的折叠过程或构象可能产生不可预知的影响，从而导致假阳性或假阴性结果。 由于该系统中设计的都是融合蛋白, 因此其特性与单纯的蛋白并不一定精确对应, 这样蛋白质间相互作用的结果可能与真正结果有些误差。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 蛋白质芯片( protein microarray) 在固体支持物表面高密度地固定化排列探针蛋白点阵,以特异地捕获样品中的靶蛋白,然后通过检测器对靶蛋白进行定性或定量分析。主要用于进行自动化分析,支持高通量快速筛选。能够同时高效地分析上千种蛋白质间的相互作用,也使得在全基因组水平研究蛋白质的功能(如酶活性、抗体特异性配体、受体交互作用)成为可能。但该项技术的使用受到了蛋白质固定化技术以及载体材料选择的限制,同时也需要复杂昂贵的仪器来对样品进行预处理和检测。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Far-Western? 又叫做亲和印记。将PAGE胶上分离好的几百样品转移到NC膜上，然后检测哪种蛋白能与标记了同位素的诱饵蛋白发生作用，最后显影。缺点是转膜前需要将蛋白复性。 等离子表面共振技术（Surface plasmon resonance）将诱饵蛋白结合于葡聚糖表面，葡聚糖层固定于几十纳米厚的金属膜表面。当有蛋白质混合物经过时，如果有蛋白质同“诱饵”蛋白发生相互作用，那么两者的结合将使金属膜表面的折射率上升，从而导致共振角度的改变。而共振角度的改变与该处的蛋白质浓度成线性关系，由此可以检测蛋白质之间的相互作用。该技术不需要标记物和染料，安全灵敏快速，还可定量分析。缺点：需要专门的等离子表面共振检测仪器。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 高通量筛选蛋白互作的方法：亲和纯化耦联质谱鉴定、细菌双杂交、酵母双杂交、蛋白质芯片等。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 酵母单杂交系统 真核生物转录调控因子具有组件式结构（modular）特征，这些蛋白往往由两个或两个以上相互独立的结构域，其中DNA结合结构域（binding domain，BD）和转录激活结构域（activation domain，AD）是转录激活因子发挥功能所必须的。 酵母单杂交系统是研究DNA-蛋白质之间相互作用的技术。（酵母双杂交系统是研究蛋白质-蛋白质之间相互作用的技术。） 将已知顺式作用元件构建到最基本启动子（Pmin）的上游，把报告基因连接到Pmin下游。将编码待测转录因子cDNA与已知酵母转录激活结构域（AD）融合表达载体导入酵母细胞，该基因产物如果能够与顺式作用元件相结合，就能激活Pmin启动子，使报告基因得到表达。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 酵母单杂交的基本原理示意图 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 从拟南芥cDNA文库中筛选与顺式元件DRE结合的 转录因子示意图。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 6.2 基因表达研究技术 基因表达系列分析技术 RNA的选择性剪接技术 原位杂交技术 基因定点突变