6原核生物基因表达的调控例析.ppt

诱导(induction) 阻遏(repression) 诱导物(inductor) 阻遏物(repressor) 辅阻遏物(corepressor) 使阻遏蛋白具有活性或使活性蛋白失去活性的物质称～。 一、乳糖操纵子(lactose operon) (一)乳糖操纵子的发现： ◆酶的诱导 葡萄糖充分时： 葡萄糖代谢有关的酶基因---表达 其他糖代谢有关的酶基因---关闭 葡萄糖耗尽时,乳糖存在 乳糖代谢有关的酶基因 ---表达 葡萄糖代谢有关的酶基因---关闭 安慰诱导物（gratuitous inducer） ◆结构基因顺序 J.Lederberg 1948 不同Lac-突变型 lacZ+Y+A+/ lacZ-Y+A+ 细菌结合转移和转导试验 证明三基因紧密连锁 I基因产物及其功能 ◆1967年 W.Gilbert 和B.Miller Hill lac I+ 或lac I- E.coli细胞提取物分别与放 射性标记的IPTG混合，发现lac I+ E.coli细胞 提取物中有某种蛋白质可以与IPTG结合，且每 个蛋白分子可以与4个IPTG分子结合，而lac I- E.coli细胞提取物中没有这种蛋白质与IPTG结 合，说明与IPTG结合的蛋白是I基因的产物 lac I+ 的离体反应液（35S标记的I基因的产物）与不同的DNA分子相互作用，发现I基因的产物不与失去lac操纵子全部基因的DNA分子结合 在有IPTG时不与lac操纵子基因结合 不与lacOC突变体的DNA分子结合 说明 I基因的产物有两个结合位点 Lac阻遏物 Lac阻遏物 结构特点 调控机制 （负调控） 由基因I编码生成的蛋白质 具有四级结构的蛋白质 具有4个相同亚基，每个亚基中都有一 与诱导剂和O基因结合的位点 Lac阻遏物与O基因结合： 结构基因关闭 Lac阻遏物与诱导剂结合： 不与O基因结合，结构基因开放 RNA聚合酶结合，转录开始 说明： ◆ I+合成特异的阻遏物，无诱导物时可阻止Z基 因表达，诱导物可作为阻遏物的拮抗物，使阻 遏物失活 ◆ I-产生无活性阻遏物，因而无需诱导物Z基因 就可表达 ◆ I+ 对I-显性 O基因组成型突变 O+Z+ - ＋ OcZ+ ＋ - OcZ+/O+Z+ ＋ ＋ OcZ－/O＋Z+ － ＋ OcZ+/O＋Z－ ＋ - 两个矛盾 ◆第一个诱导物如何进入细胞？ ◆第一个β-半乳糖苷酶如何产生？ 解释： 本底水平表达 Adenylate cyclase converts ATP into cAMP. Phosphodiesterase converts cAMP to AMP. Glucose catabolite may inhibit adenylate cyclase and stimulate Phosphodiesterase ◆ cAMP的作用： 刺激多种可诱导的操纵子。 cAMP和CAP结合后发挥作用。 ◆ CAP（分解物基因激活物蛋白） 有二个相同亚基的蛋白质 一个与DNA结合的domain 一个与cAMP结合的domain ◆ CAP和cAMP结合后,刺激操纵子,导致结构基因转录(正调控) 　 葡萄糖 cAMP Lac操纵子被抑制 原核生物基因表达的一般情况 （乳糖操纵子） 基因表达的外界信号 基因表达的负调控 基因表达的正调控 正、负调控协同表达 葡萄糖、乳糖浓度的变化 Lac阻遏物与操纵基因 cAMP+CAP与相应的DNA序列 ◆ trpR(89’)和trpABCDE(25’)不紧密连锁； ◆ 操纵基因在启动子内 ◆ 有衰减子(attenuator) ◆ 启动子和结构基因不直接相连，二者被前导顺序(Leader)所隔开 弱化作用/衰减 1978年 yanofsky发现。 前导序列 trp L （leader sequence），162bp 弱化子(a