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分光光度技术 一．概念 分光光度法（Spectrophotography），又称为比色法，它是利用物质特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。 有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长的光的吸收能力不同，因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。 比色法只限于可见光区，分光光度法可扩展到紫外光区和红外光区。使用的光谱范围200－1000nm 紫外光区：200－400nm 可见光区：400－760nm 红外光区：760－1000nm 二．基本原理 物质的吸收光谱与它们的本身的分子结构有关，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同。每种物质都具有特定的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成正比，因此可利用各种物质不同的吸收光谱及其强度，对不同物质进行定性和定量分析。 分光光度法根据的原理是Lambert－Beer定律，该定律阐明了溶液对单色光吸收程度与溶液浓度及溶液厚度之间的关系。 1. 朗伯（Lambert）定律：当单色光通过一吸收光的介质时，其光强度随吸收光介质的厚度增加而成指数减少，即 I / I0 = e－K1L I0：入射光强度， I：出射光强度， L：介质的厚度 e: 自然对数的底，即2.718 K1: 溶液的吸光率 ln（I0/I）= K1l? 换算成常用对数式，即 令K = 0.434