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绪论 1，细胞工程学的概念 细胞工程学是应用细胞生物学和分子生物学方法,在细胞水平上研究改造生物遗传特性,以获得新的有用性状的细胞系或生物体的有关理论和技术方法的学科. 细胞工程的核心技术:细胞培养与繁殖 2，植物组织培养概念 植物组织培养(plant tissue culture):利用植物离体器官,组织或细胞(包括原生质体),在适宜的人工培养基上和无菌条件下进行培养,使其生长,增殖,进而发育形成小植株的方法 狭义的组织培养仅指愈伤组织培养,而广义的则是指各种类型的植物无菌培养技术.现在,一般的组织培养概念多是指广义概念上的组织培养技术,它包括胚胎培养,器官培养,组织培养(愈伤组织培养),细胞培养,原生质体培养. 3，植物细胞工程的有关概念 外植体(explant):取自植物体用于组织培养的活的植物细胞或组织切段,或用于继代培养的组织培养物均称之为外植体. 愈伤组织(callus):愈伤组织原是指植物在受伤以后于伤口表面形成的一团薄壁细胞.在组织培养中,则是指外植体在人工培养基上诱导产生的无序生长的薄壁细胞团. 脱分化(dedifferentiation):一个成熟细胞转变为分生细胞状态的过程,或一个已处于分化状态的细胞转变为无分化状态的细胞的过程. 分化(differentiation):即分生细胞特化的过程,在组织培养过程中，分化是指将已经脱分化的细胞再诱导其转变成分化状态的过程，有时也称为再分化.通常愈伤组织再生茎,芽,根的过程就是分化. 继代培养(subculture):对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞,组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离,进行连续多代的培养,就称为继代培养. 第一章 1，实验室组成 基本实验室（准备室、接种室、培养室）和辅助实验室（细胞学实验室、摄影室及暗室、生化分析室） 2，灭菌 消毒方法 物理方法:物理灭菌,干热,湿热,射线处理,过滤,离心沉淀等 化学方法:消毒剂,抗菌素等 外植体灭菌技术:对外植体伤害小,灭菌效果好 培养基:湿热灭菌 玻璃器皿:湿热灭菌或干热灭菌,后者是在烘箱中加热到150度40分钟或120度2小时. 金属器皿:干热灭菌. 接种室:常采用定期熏蒸,常用甲醛加高锰酸钾,一般每100ml甲醛加5g高锰酸钾. 外植体:一般使用化学灭菌剂灭菌. 3，湿度的影响 培养容器内的湿度条件,容器内的相对湿度几乎是100%;环境中的湿度条件,一般要求70-80%. 4，PH 通常使用的PH值范围是5.5～6.5 5，蔗糖的作用 调节渗透压和提供碳源 6，基本培养基成分 水、无机盐（大量元素和微量元素）、有机成分（糖、维生素、肌醇、氨基酸等）、激素（细胞分裂素和生长素） 7，常见植物激素 生长素类：IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚-3-丁酸）、NAA（萘乙酸）、NOA（萘氧乙酸）、2，4-D（二氯苯氧乙酸）等 细胞分裂素类：BAP（苄氧基嘌呤）、6-BA（牙膏基腺嘌呤）、KT（激动素）等 赤霉素：GA3 8，常见培养基配方 MS、White、B5、N6 （大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、生长调节物质） 9，植物离体培养类型 组织培养、器官培养、原生质体培养、细胞培养 11，外植体来源 生长在自然环境下的植物、在温室控制环境条件下生长的植物和无菌环境下培养的植物 12，外植体取材原则 a.根据培养需求选择植物部位 b.多年生植物注意树龄和季节 c.在不影响培养目的的前提下尽可能选择自然繁殖器官作外植体 第二章 1，细胞全能性概念 一个细胞所具有的产生完整生物个体的固有能力称之为细胞 的全能性。 2，离体培养中脱分化是细胞全能性表现的前体，再分化是细胞全能性表现的最终体现。 离体培养条件下，一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生组织细胞状态的过程就是细胞脱分化，显然，细胞脱分化过程的实质就是解除分化状态。 3，外植体脱分化形成愈伤组织的2个阶段 启动期（是细胞脱分化过程的开始，也是愈伤组织形成的起点）和分裂期（细胞分裂形成愈伤组织） 4，极性 极性是指植物的器官、组织、甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。 细胞极性建立的标志：细胞的不均等分裂是 植物细胞分化的基本特征：极性的建立和维管成分的产生 5，细胞分化2个阶段 决定：早期在动物发育研究中使用这一概念，