水处理生物学实验概论.ppt

水处理生物学实验 实验要求 上课准时、不得无故缺席，实验报告要及时上交。 实验期间不得大声喧哗、服从老师的安排、注意安全。 实验器材专人专用，对仪器要爱护，损坏实行赔偿制度。 维护好实验室的环境卫生，实行值日生制度。 实验报告要求 统一用A4纸手写实验报告 封面格式 1、实验课程名称 2、实验项目名称 3、学生所在的专业、班级、姓名、学号 4、实验日期 5、同组者姓名 实验报告格式 1、实验目的 2、实验原理 3、实验仪器、溶液试剂 4、实验步骤 5、实验结果（如绘图、列表等） 6、思考题 实验内容 显微镜的使用及酵母菌、曝气池中微生物等形态观察 放线菌、霉菌的形态观察 油镜的使用、细菌的单染色和革兰氏染色 微生物大小测定、显微镜直接计数法 培养基的制备及灭菌 水体中细菌总数测定与大肠菌群生理生化反应 实验一 （一）显微镜的构造、性能和使用方法 一、目的要求 了解普通光学显微镜的构造、基本原理、维护和保养的方法 学习并掌握普通光学显微镜的正确使用方法 二、显微镜的基本结构 （一）机械装置 镜座 镜臂 镜筒：单筒和双筒两种 物镜转换器 载物台 载物台转移器 调焦装置 粗调节器 细调节器 （二）光学系统 接目镜（目镜） 接物镜（物镜） 低倍镜（10×） 高倍镜（40×） 油镜（100×） 聚光镜 虹彩光圈 反光镜 增加显微镜的分辨率 显微镜的放大倍数=物镜放大倍数×目镜放大倍数 显微镜的分辨率：显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。 D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2 ) D：分辨率 NA：物镜的数值孔径值 ?：可见光的波长（平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率 ?：镜口角（即入射角） 四、显微镜的使用方法 观察前的准备 显微镜的安置 光源调节 根据个人情况，调节双筒显微镜的目镜 右眼看清 显微观察 低倍镜观察 高倍镜观察（同焦现象） 油镜观察 在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中。 显微镜用毕后的处理 上升镜筒，取下载玻片； 用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯； 用擦镜纸清洁物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件； 将镜体各部分复原。 五、思考题 使用显微镜时哪些地方须特别？ 二、酵母菌、曝气池中微生物等形态观察 目的要求 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式； 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 观察曝气池中的微生物形态 基本原理 美蓝是一种无毒性染料.氧化型呈现蓝色,还原型呈现无色.用美蓝对酵母的活细胞进行染色,代谢活力强的细胞具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型.因此,具有还原能力的酵母活细胞为无色,死细胞或代谢能力弱的衰老细胞为蓝色. 实验器材 菌种 红酵母 啤酒酵母 曝气池活性污泥混合液 溶液或试剂 0.1%吕氏碱性美蓝染色液 仪器或其他用具 显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸。 （一）酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 制片 在载玻片中央加一滴0.1%美蓝→取菌少许→混匀→盖上盖玻片→静置3min或0.5h 观察 用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖 根据颜色鉴别死活细胞 活细胞：无色；死细胞：蓝色 （二）曝气池中微生物的形态观察 在载玻片中央加一滴活性污泥曝气池混合液→打散混匀→盖上盖玻片→低倍镜观察→高倍镜观察→绘出所观察到的微生物形态 实验结果 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。 分别绘出你在低倍镜、高倍镜观察到的菌胶团、原生动物、藻类等的基本形态。 思考题 吕氏碱性美蓝染色液作用时间不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。 实验二、放线菌、霉菌的形态观察 目的要求 学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的基本方法； 初步了解放线菌的形态特征； 了解四类常见霉菌的基本形态特征。 实验器材 菌种 细黄链霉菌，曲霉、青霉、根霉、毛霉 培养基 高氏Ⅰ号琼脂培养基 察氏琼脂培养基 溶液或试剂 0.1%美蓝染色液，乳酸石碳酸棉蓝染色液,50%乙醇 仪器或其他用具 显微镜，盖玻片，载玻片，接种环，解剖针等。 （一）放线菌的形态观察 扦片法 倒平板→取孢子划线接种→无菌操作将灭菌的盖玻片以大约45℃扦在接种线上→28℃倒置培养3-5d →取培养后的盖玻片直接镜检或用0.1%美蓝对盖玻片染色后观察 观察基内菌丝、气生菌丝、孢子丝的卷曲状况，以及分生孢子的形状，并绘图说明。 （二）霉菌的形态观察 直接制片观察法 在载玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液； 用解剖针挑取少量已产孢子的霉菌菌丝，先用50％乙醇