AKP Km值测定.pptVIP

碱性磷酸酶Km值的测定 【实验目的】 1.了解酶的Km值测定原理和方法 2.掌握碱性磷酸酶（AKP）活性测定的原理和方法 【实验原理】 在温度，PH及酶浓度恒定的条件下，酶促反应的初速度随底物浓度（S）增大而增加，但当底物浓度增大到一定极限时，则反应速度趋于恒定，此最大反应速度Vmax，反应速度与底物浓度之间的关系可用米氏方程来表示，即： Vmax?[S] V= Km + [S] 其中Km为米氏常数， Vmax为最大反应速度， 当V=Vmax/2时，则Km=[s]。 Km是酶的特征常数，测定Km是研究酶的一种方法 将米氏方程变形为双倒数方程，以l/ v－1／[s]作图，将各点连线，在横轴截距为-／km，据此可算出Km值。 1/V=Km/ Vmax?[S] + 1/ Vmax 本实验以碱性磷酸酶为例，用磷酸苯二钠为其底物，生成酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4一氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物，根据红色的深浅可测出酶活力高低。其反应式如下： 磷酸苯二钠+H2O AKP OH- 苯酚