【真诚推荐】【免费交流】生物必修二基因工程及应用.pptVIP

思考：不同生物基因间可以重组，并表达出蛋白质的物质基础是什么？ DNA的结构相同 生物界共用一套密码子 思考：DNA聚合酶和DNA连接酶的区别？ 同：作用部位相同——磷酸二酯键 异：DNA连接酶连接的是两个片段之间的磷酸 二酯键，把双链上两个缺口同时连上； DNA聚合酶只能将单个核苷酸连接到已有 的单链单链上。 基因工程及其应用 第2节 一、基因工程的概念： 别 名 原 理 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 最终目的 基因重组 生物体外 基因/DNA 分子水平 剪切→拼接→导入→表达 定向改造生物的遗传性状 基因拼接技术、DNA重组技术 1、 基因的“剪刀”——限制性核酸内切酶 二、基因操作的工具 名称由来：限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一种酶， 能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA 分子内部进行的，故名限制性内切酶。 分布： 微生物 特点： 限制酶只能识别双链DNA中特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子 例：大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开。 1、 基因的“剪刀”——限制性核酸内切酶 二、基因操作的工具 作用部位： 磷酸二酯键 作用结果： 产生黏性末端 作 用： 获取目的基因 分 布： 特 点： 微生物 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 黏性末端 思考：把目的基因切断要几个切口？切断几个磷酸二酯键？ 产生几个黏性末端？目的基因上有几个末端？ 　　连接酶的作用是：连接双链DNA片段。 2、基因的“针线” ——DNA连接酶 作用过程： 2、基因的“针线” ——DNA连接： 作 用： 将互补配对的两个黏性末端连接起来， 使之成为一个完整的DNA分子。 将目的基因和运载体相连，形成重组DNA 作用部位： 磷酸二酯键 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 3、基因的运输工具——运载体 作 用： 将目的基因运输到受体细胞 条 件： 在宿主细胞中能稳定存在并复制 有一个或多个限制酶位点 有标记基因 ——获得大量目的基因 ——便于与外源基因连接 ——便于筛选 3、基因的运输工具——运载体 种类： 质粒、噬菌体、动植物病毒等 质粒： 分布：细菌或酵母菌的细 胞质中 本质：小型环状DNA分子 特点：可进行自我复制 三、基因工程的操作步骤 从细胞中分离出DNA 从大肠杆菌中提取质粒 限制 酶 提取目的基因 限制酶 目的基因与运载体结合 DNA连 接酶 目的基因导入受体细胞 目的基因的表达与检测 基因工程操作的基本步骤 目的基因的提取方法 直接分离基因 人工合成基因 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA ：鸟枪法 二、基因工程的操作步骤 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离基因 适用范围：原核生物 过程： 1DNA 多种限制酶 多个片段 与运载体结合形成重组DNA 导入受体细胞 优点： 操作简便、广泛应用 缺点： 专一性差、盲目性大 ⑵人工合成基因法 ①反转录法： mRNA 逆转录酶 单链DNA 双链DNA（基因） ②直接合成： 蛋白质的氨基酸顺序 脱氧核苷酸顺序 直接合成相应的基因 目的基因与运载体结合 三、基因工程的操作步骤 ①相同的限制酶切割目的基因和质粒 步骤： ——获得相同的粘性末端 ②加DNA连接酶连接 ③目的基因和质粒形成 重组DNA分子 目的基因与运载体结合 三、基因工程的操作步骤