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海 南 大 学 实 验 教 学 自 编 教 材 育种学实验 农学院编 2012年4月 实验 植物的有性杂交技术 一、目的要求 通过有性杂交实际操作，熟悉植物有性杂交技术的主要操作程序。 二、实验用品 1．材料：正在开花植物植株。 2．用品：70％乙醇、镊子、硫酸纸袋、塑料小牌、棉线、干净毛笔、放大镜等。 三、时间安排 在实验课当天选取适当大小的母本花去雄后，于去雄后第二天(利用课余时间)授粉两次。然后追踪杂交结实情况，等种子成熟后连塑料小牌一起采收，上交实验老师。 四、方法与步骤 (一)在充分熟悉杂交对象的花器结构和开花授粉习性的基础上，进行杂交技术操作。 (二)有性杂交技术的主要操作步骤 1．株选：选发育正常，生长健壮，无病虫危害，具本品种典型特征的植株作为亲本植株。 2．选花：一般要选植株上结实性强的部位的花，这些花应是即将开放，但花冠尚未展开、花药尚未散粉的露冠大花蕾或初放的花。 洋金凤（总状花序生枝顶，花瓣具柄，黄色，红色。雄蕊长两倍于花冠。 雄蕊通常10，很少多数，花药各式，通常纵裂，有时顶孔开裂；子房上位，1室；）是自花授粉植物，初放时已自花授粉。玉米为雌雄同株异花的异交植物，当雌穗从叶腋中露出尚未吐丝时选择花朵进。 3．去雄 去雄的操作是镊子仔细夹除全部花药，切勿将花药夹破或残留部分破碎花药。去雄一定要非常小心，切勿伤及雌蕊柱头、花柱，子房等部位，否则雌蕊极易死亡。去雄后打去多余的花朵、花蕾、立即套袋隔离，并挂牌写明杂交组合，操作者姓名，杂交时间等项目的小牌。玉米则在雄蕊未能成熟前剪去雄蕊。 洋金凤则除去未成熟的全部雄蕊，即去雄。具体做时，先要寻找合适的花的枝头，剪去已开放的花，留下5-10个大小适合的花苞进行人工授粉。用尖头镊子拨开花蕊（可除去一部分花瓣，方便授粉），除去里面所有的雄蕊，留下雌蕊。 4．授粉 去雄当天或第二天，用事先隔离或事先搜集的，未受污染的纯净父本花粉授粉，可用毛笔、镊子、海锦、橡皮头等沾取父本花粉，轻轻涂到母本柱头上，用肉眼或放大镜观察到柱头上已沾上花粉粒就行了。在正常天气下，授粉时间在上午9—11时较为适宜。同时配制几个杂交组合时，完成一个杂交组合的授粉，就应把授粉用具放在70％的酒精中，杀死沾在上面的花粉粒。 玉米则可将其它植株的雄蕊花粉抖在雌蕊花丝上，也可将父本的植株种在母本旁，将其自行接受父本花粉。 洋金凤则可取其他花中已成熟的雄蕊，将其在已去雄的母本柱头上。涂抹上花药后可以观察到有明显的花药沾附在柱头上。 5、套袋、挂牌 轻轻将已去雄授粉的花套在一端开口的隔离袋中，在其花枝上挂上标签牌，写上父本、母本类型和授粉日期。 5．杂交后的检查 杂交后继续套袋一周，然后去除纸袋，检查着子房开始膨大，证明杂交成功了。 6．杂交后的管理和种子采收 杂交应加强植株的管理，及时整枝、打去多余的花朵或花枝，使养分集中供应杂交的果实、种子。还要注意多施P、K肥，及时防治病虫害。待杂交果实成熟后，及时采收。采收时分清组合，切忌机械混杂和丢失杂交小牌。 五、作业与思考题 1．列表记载杂交结果(包括杂交组合、去雄和授粉日期、授粉花数，结实粒数和结实百分率等项目)。 2．根据实际体会，谈谈杂交的各个环节要注意那些问题。 附；洋金凤杂交时注意事项 1、去雄时，可除去部分或者全部花瓣，以免影响授粉过程。 2、去雄时要轻缓，防止其自身花粉脱落，粘在柱头上，影响实验。 3、低温及干热风等不良天气直接影响人工授粉的效果，所以应选在晴天上午授粉最佳，并且低于15℃授粉效果不理想。 4、授粉时花粉要具有一定的数量，需要在柱头上轻轻涂抹数次，保证有足够的花粉，有时甚至要连续几天授粉，从而保证结果率。 实验 花粉生活力的测定 一、目的要求 通过实验，初步掌握植物花粉生命力的测定方法。 二、实验用品 1．材料：各种事先贮备用的花粉粒和采集的新鲜花粉粒。 2．用品：计数器、载玻片、盖玻片、酒精灯、灯架、石棉网、小烧杯、特种铅笔、玻棒、恒温箱、标签、蔗糖、琼脂、硼酸、蒸馏水、PH试纸、1％碘—碘化钾溶液、0.5％或I％TTC液、а—萘酚、联苯胺、碳酸钠、30%过氧化氢溶液。 三、方法步骤 1、形态检验法(适用于新鲜花粉) 抖少许新鲜花粉在载玻片上，滴入1—2滴蒸馏水，盖上盖片，在显微镜(40 × 10)下观察。充实、饱满、形态正常的有生活力，而畸形、皱缩、瘦小的无生活力。 注意识别不同花粉的形态特征，如波斯菊花粉为圆形，金盏菊花粉为三角形等。 2、人工发芽法 花粉的人工发芽效果与培养基配方，发芽的温度、湿度密切相关，不同的植物