热原试验_演示文稿..ppt

热原检查法 家兔热原试验 每日一话题 试验目的 将一定剂量的供试液(医疗产品的萃取液)，静脉注入家兔体内，在规定的时间内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品是否具有潜在的致热作用。 依据方法： GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法；中国药典2010； ISO 10993-12:2005{GB/T16886.12-2005}. 热原试验的应用 热原试验应用于药物及医疗产品的检测（注射器、输液器、输血器、引流管、手术器械等等） 热原概念 热原：引入或释放到机体内后能引起恒温动物体温异常升高的物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。 热原引起机体发热机理 外源性致热原多为大分子物质，特别是细菌内毒素分子量非常大，不能通过血脑屏障直接作用于体温调节中枢，而是通过激活血液中的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核一吞噬细胞系统，使其产生并释放内源性致热原，通过下述机制引起发热。 热原引起机体发热机理 热原—白细胞(WBC)—吞噬—白细胞崩解，释放内源性致热源原—作用于体温调节中枢—产热增加、散热减少—体温上升 实验设备及材料 超净工作台、电热干燥箱、水浴锅、天平、电子称、肛门体温计（仪器设备需经国家相关部门检定）、注射器、三角烧瓶、棉球、家兔固定架、时钟等等。 所用试剂： 医用生理盐水、75%乙醇、凡士林。 供试液的制备 依据标准：ISO10993：12（GB/T16886.12） 按0.2g:1ml（样品:生理盐水）的比例进行萃取，条件为37±1℃，时间为72±1小时。萃取液应在2小时内使用完毕。 试验家兔饲养环境 1 在做热原检查前1~2日，供试用家兔 应处于同一温度环境中； 2 实验室和饲养室的温度相差不得大于3℃，实验室的温度应控制在17~25℃；3 在试验全部过程中，应注意室温的温度变化不得大于3℃，防止动物骚动并避免噪声干扰。 试验家兔的选择 1. 未曾用于热原检查的家兔； 2. 或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔； 3. 或3周内未使用的家兔，均应在检查供试品前3~7日内预测体温，进行挑选。挑选试验用家兔的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0~39.6℃的范围内，且最高与最低相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。 试验家兔的选择 ㈠家兔应健康，雌雄不限，体重1.7kg以上，雌兔应无孕。预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象(科学饲养)。 ㈡ 用于热原试验后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再本试验用，其中体温升高0.6 ℃ 以上的家兔，至少休息两周后以上。如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过10次。 试验家兔的选择 （一）家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于适宜的装置中，直到试验完毕。应使用精密度为±0.1℃的测温装置测量家兔体温。测温探头或肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不少于1.5分钟，每隔30分钟测量体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃. 试验前家兔的准备 试验前家兔的准备 （二） 以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0~39.6℃的范围内，且各兔间的正常体温之差不得超过1℃. 试验前器械的准备 注射器（带针头）及一切与供试品溶液接触的器皿应是无菌、无热原，如试管等应采用干热灭菌法置烘箱中用250℃加热至少30分钟，也可用其他适宜的方法除去热原。 试验方法 取适用的家兔3只，测定其正常体温后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量(10ml/kg)并温热至约38℃的供试品溶液，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度。 试验方法 如3只家兔中有1只体温升高了0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔体温升高均低于0.6℃，但体温升高的总和达1.3℃或1.3℃以上，应另取5只家兔复试，检查方法同上。 结果判断 ㈠在初试的3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔不超过1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或3.5℃以下，均判为供试品的热原检查符合规定。 结果判断 ㈡ 在初试的