白细胞分类计数白细胞分类计数.doc

白细胞分类计数 [定义] 白细胞分类计数是将血液制成分布均匀的薄膜涂片，用染料染色，根据各类白细胞着色特征，在显微镜下观察其数量、形态和质量的变化、予以分类计数并求出各种白细胞所占的百分率。 [意义]血液中的白细胞一般包括：颗粒细胞（嗜中性、嗜酸性和碱性细胞）、淋巴细胞（大、中、小淋巴细胞）和单核细胞，它们分工不同，在体内发挥各自的作用。①嗜中性白细胞，成熟的嗜中性白细胞通过吞噬作用而消灭入侵的细菌，特别是球菌。在严重感染和炎症初期时最活跃；②嗜酸性白细胞，常积聚在抗原-抗体反应的部位，因此，认为它抑制组胺等物质的活动；③嗜碱性白细胞，碱性颗粒中有肝素，表明它有抗凝作用；④淋巴细胞；参与机体免疫反应；⑤单核细胞；它有特殊的酶系统，能对付顽强的病原体，如真菌、原生动物、结核杆菌及布病等。在慢性感染时或体内有较多组织碎片需要清除时，它会大量出现。 在正常情况下，白细胞构成的比例、形态和质量基本是不变的，但在病理情况下，这种比例、形态、质量将会发生变化，故临床上常把计数白细胞总数和分类计数结合起来，进行分析和诊断某些感染性疾病的种类。 [目的与要求]掌握计数的原理、方法和临床意义 [原理]由于白细胞内含有带不同电荷的物质，其中带正电荷的物质易与酸性染料结合呈现红色（这种物质叫嗜酸性物质或颗粒，而其本身呈碱性）；而带负电荷的物质易与碱性染料结合呈现蓝色（这种物质叫嗜碱性物质或颗粒，而其本身呈酸性）；当细胞内物质带的正负电荷相等时，那么结合的酸性染料和碱性染料几乎相等，这些物质就呈现红、蓝相混的紫红色（这种物质叫嗜中性物质或颗粒）。这样血片中的白细胞经过染色后就被染成红、蓝及紫红色，从而可以识别分类。 【器材与试剂】 器材：载玻片、染色缸及支架、洗瓶、显微镜及镜油、白细胞分类计数器、吸水纸等。 试剂：染液、缓冲液 [步骤] 1．采血 2．制作血涂片：①取洁净载玻片数张，选择边缘光滑的载片作为推片（也可用血细胞计数板的盖玻片做为推片），用左手的拇指及中指夹持载片并置于平稳的台面上，右手持推片。 ②取被检血（经EDTA抗凝）1小滴，放于载玻片的右端，手持推片放于血滴之前并与载片接触，以30°～40°角向后拉动推片，使之与血滴接触，待血液扩散形成一条线状之后，以均等的速度轻轻向前推动推片，则血液就被均匀地涂于载片上而形成一薄血膜。良好的血片，血液应分布均匀，厚度要适当，对光观察时呈霓红色，血膜应位于玻片中央，两端留有空隙，以便标上患畜名称、畜别、编号、日期。常温下自然风干（冬天可适当加温）。 3．染色 3．1单染色 瑞氏染色：滴加染液（约20滴）盖满血膜，染1分钟后，再加等量的缓冲液，继续染色3～10分钟（外界温度低染色时间长，反之亦然），用水冲去染液，吸干染片，干燥后，油镜观察。对胞浆及颗粒染色效果好。 姬姆萨氏染色：在血膜上先加2-3滴甲醇使血膜固定，3-5分钟后待甲醇挥发后再加染液；染色20-60分钟（依外界温度高低而定染色时间长短）；水洗，干后油镜观察。对胞核及血液原虫染色效果好。 3．2复染色（混合染色） 瑞氏-姬姆萨氏复合染色：先加瑞氏染液，半分钟后用水洗去染液；再加姬姆萨氏染液染约10分钟，水洗、干燥镜检。 或在临染色时向瑞氏染液中加入适量的姬姆萨氏原液，即每10毫升瑞氏染液中，加入0.5-1.0毫升姬姆萨氏原液，混匀后，按瑞氏染色的步骤进行染色。 4．镜检分类计数 方法: 四角曲则计数法或三段曲则计数法. 步骤: (1)先用低倍镜观察血片上白细胞的分布情况. 一般嗜中性白细胞, 单核细胞及体积较大的细胞分布在血片的上, 下边及尾端, 中小淋巴细胞则多在涂片的起始端. (2)滴加镜油, 转用油镜头进行计数. 至少数100个白细胞，根据染色特点，分别计数各类白细胞的数量，最后求出各类白细胞占总数的百分比。 [白细胞分类计数的临床意义] 1．判断可能的感染或疾病的状况 1）．嗜中性白细胞： （1）增多：见于某些急性传染病（猪丹毒、炭疽、出败等）和慢性传染病（鼻疽、结核等），某些化脓性疾病（脓性胸膜炎、脓性腹膜炎、肺脓肿及创伤性心包炎等），某些急性炎症（急性胃肠炎、急性肺炎、急性子宫内膜炎和乳房炎等），术后一周内，酸中毒的初期，毛地黄中毒以及肾上腺素中毒等。 （2）减少：见于病毒性疾病以及病危期，造血机能受阻或衰弱；怀骡子的母驴在妊娠中毒症时，嗜中性白细胞显著减少。 2）．嗜酸性白细胞： （1）增多：见于某些寄生虫病（肝片吸虫病、球虫病、旋毛虫病等），某些过敏疾病（饲草过敏、寻麻疹、注射血清后等），皮肤病（湿疹、疥癣等） （2）减少：见于毒血症、尿毒症、严重创伤及中毒等。 3）．嗜碱性白细胞：增多或减少较少见。 4）．淋巴细胞： （1）增多：见于某些慢性传染病（如结核、布病等），急性传染病的恢复期，某些病毒病（猪瘟、流感等）以及