土壤中分解尿素的细菌分离和计数讲义.ppt

课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 微生物的培养与应用 细菌脲酶 尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸 收利用 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 课题背景 课题目的 土壤中尿素分解菌的分离 与计数 从土壤中分离出能够 分解尿素的细菌 统计每克土样中究竟 含有多少这样的细菌 思考：PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93 ℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找？(　　) A．土壤中　　 B．海水中　　 C．热泉中　　 D．冷库中 C 如何寻找耐高温的酶？ —寻找高温环境； 原理：热泉70-80℃的高温条件淘汰了绝大多数的微生物，使得耐热的Taq细菌脱颖而出。选出耐高温细菌后，从耐高温菌种中提取耐高温酶。 1、自然界中目的菌株的刷选原理： 一、筛选菌株 2、实验室中筛选微生物的原理： （纯且活的菌种） 在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求， 到相应的环境中去找。 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、 温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 此配方能否筛选出分解尿素的细菌？为什么？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。 3、方法： 利用选择培养基分离 选择培养基： 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止 其他种类微生物生长的培养基。 (1)在培养基中加入某种化学物质。 利用选择培养基分离微生物的方法： 例如，加入青霉素可以分离出 ； 加入高浓度的食盐可以得到 。 酵母菌和霉菌 金黄色葡萄球菌 这里的加入是在培养成分的基础上加入。 (2)改变培养基中的营养成分。 例如，缺乏氮源时可以分离 ； 尿素作为唯一氮源时，可以分离出 石油作为唯一碳源时，可以分离出 固氮微生物 能消除石油污染的微生物 能分解尿素的细菌 (3)改变微生物的培养条件。 例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到 耐高温的微生物 本课题使用的培养基的配方如下： 成分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4 ·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 水 含量 1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 1000 mL 请分析后回答： (1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是________和________。 (2)该培养基为____________培养基(按物理状态分)，理由是______________。 (3)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？______________________________________ ______________________________________。 葡萄糖 尿素 固体 有凝固剂琼脂 有选择作用。此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能 够利用尿素的微生物才能够生长 二、统计菌落数目 1、方法： 常用稀释涂布平板法统计活菌的数目 原理： ?当样品的 时，培养基表面生长 的一个菌落来源于样品稀释液中的 。 为了保证结果准确，一般选择菌落数在 统计 ?通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品 中大约含有多少的活菌。 要求： 30～300 个菌落的平板 稀释度足够高 一个活菌 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值