脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告模板一..docVIP

医学微生物学实验报告 姓 名___ __________ 学 号___ ________ 年 级___ ____ 组 别__ ______ 实验名称 实验者 合作者 日期 指导老师 2、掌握细菌的分离培养方法 3、掌握油镜的正确使用，细菌标本图片的制备 4、掌握细菌的形革兰氏染色法以及形态学检查方法 5、熟悉细菌的生化试验方法（糖发酵试验、抗菌素敏感性试验、血浆凝固酶实验、动力学实验）的原理及方法 6、掌握玻片凝集试验的原理及方法 二、实验器材 1、5ml试管15支、托盘天平、锥形瓶、营养肉汤干粉培养基、量筒、使馆狂、酒精灯、洗耳球、刻度吸管 2、脓汁标本1支，粪便标本1支、伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个、接种环、酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把。 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 流程图： 营养肉汤培养基的制备 ①称取1.1g营养肉汤干粉培养基于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水溶解 ②加热煮沸1次，加热时需要摇动 ③分装于15支小试管中，每支3ml ④集中放在试管筐中，罩上硫酸纸和牛皮纸，用橡皮筋包扎好 ⑤灭菌 2、细菌的分离培养 平板画线法： 小组分工 ： 甲→脓汁标本→营养琼脂平板 丙→粪便标本→伊红美蓝平板 乙→脓汁标本→营养琼脂平板 丁→粪便标本→伊红美蓝平板 步骤： ①点燃酒精灯，把接种环在酒精灯上烧灼灭菌，金属杆快速通过火焰2～3次，以杀灭表面微生物。 ②取出标本，在火焰旁边，左手斜持标本管下端，右手小指夹住试管棉塞上端，缓慢拔出棉塞并夹持之，管口迅速通过火焰3次 ③将冷却的接种环沾取标本1环，管口迅速通过火焰灭菌后塞上棉塞放回。 ④接种环与平板呈30～40度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。画完第一区要烧掉接种环上多余的标本。 转动平板，转动平板，通过第一区5～7次，使接种环重新沾上少量细菌，同样的方法划过第二到五区，接种环呈递减次数地通过第二到第四区。 ⑤平板倒置，37℃培养18~24h,观察结果。 3、细菌的纯培养（斜面接种法） 分工： 甲→金黄, 乙→白色。 丙→紫黑, 丁→粉红。 步骤： ①取制作的平板，在菌落分布最稀疏的区域，选择平板上典型的、容易挑取的单菌落。（从营养琼脂平板中分别选取金黄色菌落、白色菌落，从伊红美蓝平板上分别选出紫黑色菌落、粉红色菌落。） ②接种环套住菌落，轻轻刮取细菌。 ③接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉一条细菌接种线。再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线。 ④37℃培养24小时，观察结果。 细菌形态学检查（革兰氏染色法） ①加样枪取盐水左3ul、右3ul,水滴间距小于2cm。 ②挑取菌苔少许（1mm小菌落的半量）与生理盐水混匀，涂成1cm2大小的均匀薄膜 ③涂毕，环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破裂，将接种环通过火焰灭菌 ④涂片在室温干燥或烘干，手持玻片一端，标本面朝上，在火焰外层快速通过2~3次，将标本固定，促使菌体蛋白质凝固，固定在载玻片上，以免染色水洗的时候，细菌被水洗掉。 ⑤革兰染色： 初染：结晶紫 → 初染1分钟→水洗 ↓ 媒染：卢戈碘液→媒染1分钟→水洗 ↓ 脱色：95％乙醇→脱色约20秒钟→水洗 ↓ 复染：稀释品红→复染1分钟→水洗 ↓ 吸干,镜检。 液体培养基接种 分组：甲→金黄 乙→白色, 丙→紫黑 丁→粉红。 ①无菌操作，接种环斜面取菌，在靠近培养基液面管壁上，上下研磨接种。 ②在管壁上，将接种环内的菌膜拍破。退出接种环，烧灼灭菌。 6、细菌的生化实验 （一）半固体穿刺接种法 分工：甲→紫黑, 乙→紫黑； 丙→粉红, 丁→粉红。 ①无菌操作，接种针斜面取菌，从半固体中心,垂直刺入，到达培养基底部5分之4处，再循原来的路线,退出接种针。 ②管口、接种针经火焰烧灼灭菌。 （二）细菌的糖发酵试验 分工：甲→紫