蛋白质重点蛋白质重点.docVIP

一、名词解释 1、蛋白质组：由Marc Wilkins在1994年提出，由 protein 与genome复合而成。一种基因组所能表达的全套蛋白质；一种生物中不同细胞的不同蛋白质的组合；一个细胞内的全套蛋白质，反映特殊阶段、环境、状态下细胞或组织在翻译水平的蛋白表达谱。 2、双向凝胶电泳（二维凝胶电泳）：是目前能将数千种蛋白质分子同时分离与展示的唯一的分离技术 （色谱技术不能同时展示在一张图上）。 3、色谱—质谱技术：弥补以2-DE/MS 为基础的蛋白质组技术方法的不足。 4、蛋白质图像分析系统：完成2-DE后，凝胶图像要扫描保存， 以数字化图像的形式储存起来。 5、质谱 （MS）：特殊的天平：称量离子的质量，离子源到质量分析器再到检测器最后依据不同方式将样品离子按质荷比 m／z分开。 6、肽质量指纹谱（PMF)是指蛋白被酶切位点专一的蛋白酶水解后，得到的肽片段质量图谱。由于所产生的肽段具有特定序列、长度，因而具有特定的质量，且产生的片段数目亦有特异性，故称指纹谱 7、多级质量分析器：三级四极杆质量分析器由三个顺序连接的四极杆构成，第一、三分别用于母离子和子离子选择（扫描），第二个用于碰撞解离产生子离子。 8、四极滤质器：四极滤质器（四极杆）由四根平行金属杆组成，理想的四杆为双曲线，但常用的是四支圆柱形金属杆，被加速的离子束穿过对准四根极杆之间空间的准直小孔。通过在四极杆上加上直流电压U和射频电压Vcosωt，在杆间形成一个射频场，离子进入此射频场后，会受到电场力作用，只有合适m／z的离子才会通过稳定的振荡进入检测器。只要改变U和V并保持U／V比值恒定时，可以实现不同m／z的检测。 9、肽序列标签技术（PST）：数据库检索鉴定蛋白质时，可用读出的部分氨基酸序列结合此段序列前后的离子质量和肽段母离子质量，在数据库中查寻，这一鉴定法称为肽序列标签技术。 二、填空 1、蛋白质组的技术基础 （三大支撑技术）：双向电泳、生物质谱技术、计算机为基础的图像分析及相应数据库构建。 2、ICAT试剂由三部分组成：活性基团、连接子、生物素 3、二维色谱有多种组合模式：常用离子交换色谱或凝胶过滤色谱、反相色谱。 4、细胞裂解的方法：温和的裂解方法（用于比较简单的样品：组织培养的细胞，血细胞、微生物或细胞器。）、剧烈的裂解方法（用于难以破碎的细胞，如固体组织内的细胞，或具有坚硬细胞壁的细胞，比如酵母。）、用蛋白酶抑制剂防止蛋白裂解（细胞裂解，蛋白酶释放出来，必须加以抑制。蛋白酶在低温下无活性，所以尽量在低温制备）、通过沉淀分离、清除影响二维电泳图谱的杂质 5、温和的裂解方法:渗透裂解（低渗溶液悬浮细胞）、冻融裂解（用液氮迅速冷冻细胞 (1-2 min)，随后在37℃ 融化(1-2 min) ，反复几次。）、去污剂裂解（主要用于组织细胞。含有去污剂的缓冲液重悬细胞）、酶裂解法（裂解植物、真菌和细菌等有细胞壁的细胞。） 6、等渗缓冲液含有某种酶：溶菌酶—— 细菌；纤维素酶和果胶酶—— 植物细胞；溶细胞酶—— 酵母细胞 7、剧烈的裂解方法：超声裂解法、弗氏压碎法、研磨法、机械匀浆法、玻璃珠匀浆法 8、强变性剂：8 mol/L尿素、10% TCA 或 2% SDS但在上述条件时，仍有些蛋白酶保持一定活性，所以需要加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。 9、沉淀方法：硫酸铵沉淀（盐析）、 TCA沉淀（三氯乙酸沉淀）、丙酮沉淀、在冰丙酮中用TCA沉淀、苯酚提取，然后在甲醇中用醋酸铵沉淀。 10、清除影响二维电泳图谱的杂质一方面沉淀分离蛋白，另一方面除去杂质 11、双向电泳与蛋白质分离是利用了蛋白的两个特性对其进行分离：等点聚焦电泳是利用蛋白的等点电进行分离；SDS—PAGE是利用蛋白的相对分子量分离 12、修饰基团有20多种类型，常见的有磷酸化、糖基化和乙酰化等。 13、糖蛋白分子结构具有不均一性——微不均一性（不同的糖链连接与同一位点），糖蛋白的微不均一性，使得分子离子峰变宽，检测灵敏度降低。显著不均一性（同一蛋白质不同的氨基酸位点连接糖）。 14、通过沉淀分离蛋白分离策略：沉淀蛋白质，使之与其它成份分开，再重悬溶解蛋白质。 附带作用：浓缩较稀的样品（如植物、尿液等）。注意：某些蛋白会由于重悬造成一定的丢失。 三、简答 1、蛋白质组学诞生的背景？ 答：基因组的局限性；全方位蛋白质研究的迫切要求；医药研究开发的巨大需求 ；高通量分离、鉴定技术的出现；计算机信息科学的有力支持 2、蛋白质组学的几个主要研究方向？ 答：1）针对已有基因组或转录组数据库的物种或组织/细胞，建立蛋白质组或亚蛋白质组（蛋白表达谱）及蛋白质组连锁群— compositional proteomics（完全蛋白质组学：检测一种细胞或一种组织内基因组表达的所有蛋白质 ）。2）以重要生命过程或人类重大