1.2基因工程的基本操作程序解析.ppt

环保型交通工具 一、目的基因的获取 1、什么是目的基因？ 2、获取目的基因的方法有哪些？其操作过程分别是怎样的？ 一、目的基因的获取 1.目的基因概念： 主要指的是编码蛋白质的结构基因。也可以是一些具有调控作用的因子。 2、目的基因获取方法： （1）从基因文库中获取目的基因 （2）利用PCR技术扩增目的基因 （3）化学方法直接人工合成 (一)从基因文库中获取目的基因 1.基因文库 基因文库 （1）基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. （2）部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库，如：cDNA文库。 cDNA文库的构建 原核细胞的基因结构 基因组文库和cDNA文库的比较 (一)从基因文库中获取目的基因 如何从基因文库中找到所需要的基因？ （二）利用PCR技术扩增目的基因 （二）利用PCR技术扩增目的基因 PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可在短时间内获取大量的目的基因。 1.启动子的作用： 三、目的基因导入受体细胞 1、什么是转化？ 2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？ 3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？ 三、目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？ 2、什么是基因探针？检测时的基因探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？ 3、利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？ 2.基因探针 基因探针（probe）又称“寡核苷酸探针”，简称“探针”，就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 注：1.探针可以用放射性同位素或者荧光等标记。 2.探针与目的基因或是mRNA杂交后通过特定的装置会显示出杂交带。 3.基因探针检测目的基因和相应的mRNA 分子杂交技术 原则：碱基互补配对 ( 1 ) DNA—DNA分子杂交配对原则 A-T;C-G. ( 2 )DNA—mRNA分子杂交配对原则 A-U;T-A;G-C. 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 三、将目的基因导入受体细胞 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 机理: 能感染双子叶植物和祼子植物,对大多数单子叶植物无感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 （2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 （3）花粉管通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 2、将目的基因导入动物细胞 方法: 显微注射技术 操作程序: 提纯含目的基因表达载体 取受精卵 显微注射 移植到子宫 受精卵发育 新性状动物 早期胚胎 3、将目的基因导入微生物细胞 常用法：Ca2+处理 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 增加细胞壁的透性，与细胞膜无关 1.目的基因的检测与鉴定 检测 ①导入检测： 方法： DNA-DNA分子杂交 ②表达检测 转录检测： 翻译检测： 分子检测法 鉴定 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定 个体水平的鉴定 DNA —mRNA分子杂交 抗原-抗体杂交 目的基因是否导入受体细胞 知识延伸——DNA分子杂交技术 该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单股的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。 目的基因检测：DNA-DNA分子杂交技术 1．下列关于基因结构的认识中，正确的是( ) A．大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列 B．乳酸菌与