发酵学第2章工业微生物的菌种选育重点.ppt

3.筛选 根据步骤可以分为初筛和复筛 初筛 量大，条件粗放。一个菌种进一个摇瓶。 复筛 条件要求应逐步提高。 每个菌株进3~5个摇瓶，如果生产能力继续保持优异，再重复筛选几次。 注意 亲株作对照。 复筛后的优良菌株要考查其稳定性、菌种特性和最适培养条件 根据操作方法可分为随机筛选和理性化筛选 随机筛选 理性化筛选 运用遗传学、生物化学的原理，根据产物已知的或可能的生物合成途径、代谢调控机制和分子结构来进行设计和采用一些筛选方法。从而打破微生物原有的代谢调控机制，获得能大量形成产物的高产突变株 经过诱变处理后，进行平板分离，随机挑选单菌落，筛选高产菌株 　　1）摇瓶筛选法 　　　单菌落→传种斜面→模拟发酵瓶→测定发酵能力 　　2）琼脂块筛选法 　　　打孔取块 → 鉴定平板测定发酵能力 → (须经摇瓶复筛) 随机筛选 3）筛选自动化和筛选工具微型化 随机筛选 96孔板高通量孵育筛选 随机筛选 1.初级代谢产物高产菌株的筛选　　　 ①筛选营养缺陷型 理性化筛选 理性化筛选 ②筛选细胞膜透性改变的突变株 使之大量分泌终产物，以降低细胞内终产物浓度，从而避免终产物反馈调节。 谷氨酸棒杆菌生物素营养缺陷型 细胞膜通透性 谷氨酸分泌至胞外 理性化筛选 ③筛选结构类似物抗性突变株　　　　　　 用与代谢产物结构类似的化合物处理微生物细胞群体，杀死或抑制绝大多数细胞，选出能产生该代谢物的抗反馈突变株。 理性化筛选 2.次级代谢产物(主要是抗生素)高产菌株的筛选 　　　 (1)利用营养缺陷型筛选（渗漏缺陷型） 　　　　　 渗漏缺陷型：遗传性障碍不完全的营养缺陷型，突变使某一种酶的活性下降而不是完全丧失，所以这种缺陷型能够少量地合成某一代谢产物，能在基本培养基上少量的生长 理性化筛选 　　　(2) 筛选负变株的回复突变株 选择经过诱变处理后抗生素生产能力明显降低或完全丧失，但其他性状仍近于正常的突变株作为实验材料，进行诱变，再挑选高产菌株。 理性化筛选 　　　 (3) 筛选去磷酸盐调节突变株 　　　　　① 能在磷酸盐抑制浓度下，正常合成抗生素的突变株 　　　　 ② 磷酸盐结构类似物(砷酸盐、钒酸盐)抗性突变株 　　　 (4)筛选去碳源分解代谢调节突变株 　　　　 能被菌快速利用的碳源在被快速分解利用时，往往对许 多其他代谢途径中的酶有阻遏或抑制作用，成为抗生素发酵产量的限制因素。筛选去碳源分解代谢调节突变株，可提高抗生素发酵产量，简化生产工艺。 理性化筛选 ＊筛选出赖氨酸类似物抗性株→ (5) 筛选氨基酸结构类似物抗性突变株 　＊半光氨酸、缬氨酸→青霉素前体→青霉素　　　 理性化筛选 　　 (6) 筛选二价金属离子抗性突变株 (7) 筛选前体或前体结构类似物抗性突变株 　　　　　① 不能合成或很少合成的前体 　　　　苯乙酸和苯氧乙酸（有毒性）→青霉素侧链前体 　　　　　② 能合成但不能大量累积的中间产物 　　　　　　　丙酸（干扰初级代谢中间产物）→红霉素 　　　　　③初级代谢终产物，有反馈作用不能大量累积。 　　　　　　　缬氨酸→青霉素 　　　(8)筛选自身所产的抗生素抗性突变株 理性化筛选 校正差错：光复活作用、切补修复 引起差错：重组修复、SOS修复系统。 3、从前突变到突变 （二）突变诱发的过程 表型迟延：表型的改变落后于基因型的改变 分离型迟延 (基因杂合) 经诱变处理后，细胞中的基因处于不纯的状态，突变型基因由于属于隐性基因而暂时得不到表达，需经过复制、分离，在细胞中处于纯的状态时，其性状才得以表达。 生理性迟延 　新的表型必须等到原有基因的产物稀释到某一程度后才能表现出来。 4、从突变到突变型 （二）突变诱发的过程 从菌种保藏中心购买 育种 从自然界中筛选 诱变 杂交育种 基因工程育种 四、菌种来源 第一节 概述 source 1 国际承认的中国培养物保藏单位 武汉大学的 中国典型培养物保藏中心 CCTCC。保藏了几乎所有的培养物。 中科院微生物研究所的 中国普通微生物菌种保藏管理中心 CGMCC。保藏有普通菌种。 (CGMCC) 中国微生物菌种保藏管理委员会 CCCCM——管理机构 订购程序 申请 生物安全性说明 确认 订货 一、定义 二、方法 三、特点及应用 第二节 自然选育 自然选育：在生产过程中，不经过人工诱变处理，根据菌种的自发突变而进行菌种筛选的过程。 自发突变：就是指某些微生物在没有人工参与下所发生的那些突变。 一、定义 多因素低剂量的诱变效应 互变异构效应 第二节 自然选育 二、菌种自然选育方法 单菌落分离法 菌种 单细胞悬液 琼脂板分离 挑取单菌落 测定生产能力 细菌：转种