制备液相色谱技术(LC-MS)汇总.pptVIP

高效制备液相色谱技术 高效制备液相色谱的原理： 经典的制备色谱方法与高效制备液相色谱的异同及优缺点： 浓度过载和体积过载色谱示意图 由分析型色谱如何扩展到制备型色谱？ 扩展计算 扩展计算举例 扩展计算举例 在分析型色谱柱上，不同进样量的色谱图 制备液相馏分收集的三种方式 基于时间（Time-based） Time-based 基于峰（Peak-based） 利用正、负斜率按峰进行馏分收集。 基于质量（Mass-based） Mass-based 三种馏分收集方式的比较 高效制备液相色谱流路示意图 1、延迟体积校正2、扩散影响 什么是延迟体积？ 高效制备液相色谱流路示意图 延迟体积校正 扩散 经扩展计算，采用不同的柱径、进样量和流速样品的色谱图 上述五种色谱状态的参数： 在制备型色谱柱上的色谱图 1. 基于时间（Time-based） 2. 基于峰（peak-based） 3. 基于质量（Mass-based） 根据馏分的保留时间及其色谱峰宽，以时间作为馏分收集器动作的指令参数。 特点： 参数设置方便，样品收益高、损失少。 色谱保留时间的不稳定会影响到馏分的纯度和收益。 用峰的时间分割，按峰收集馏分 色谱峰重叠严重，重叠面积很大，收集到的两个馏分将明显不纯。－－－这时应考虑使用Time-based。 Time-based 根据色谱峰的正负斜率，触发馏分收集器，以色谱峰正负斜率作为馏分收集器动作的指令参数。 特点： 馏分纯度高。 馏分保留时间的不稳定不会影响到馏分的纯度。 参数设置不方便（斜率参数需计算）；受色谱峰峰形改变的影响较大。 样品收益低。 Peak-based 正、负斜率和阈值可预先设置。 当色谱信号都超出预先设置的正斜率和阈值两个参数时，将触发峰的收集信号； 当色谱信号低于阈值或低于预先设置的负斜率时，将触发停止收集信号。 设置阈值的目的是为了消除噪声的影响。 Peak-based实例（只收集后面这一组分） 根据馏分的质量作为指令参数，触发馏分收集器。 特点： 馏分纯度高、且收益高； 馏分保留时间以及色谱峰峰形改变都不会影响到馏分的纯度； 参数设置方便； 需配备MS检测器，设备费用投入较大。 当使用按质量进行馏分收集时，只有当MSD检测到色谱峰含有目标质量数，且该目标质量数的强度超出特定的阈值时，馏分收集才被触发。这就确保了在每次进样中只收集含目标化合物的馏分。大部分情况下只有一个馏分。 不足之处是注入的其他样品组分不能回收。 按质量数进行馏分收集的结果 高 高 Mass 不高 高 Peak 高 不高 Time 馏分收益 馏分纯度 X-Based 它们与纯度、产量和收益（PTY）的关系怎样？ 结合实际需求合理选择。 三种馏分收集方式如何选择？ 两个问题： 理想情况下，当检测器检测到组分信号时，同一时刻，组分也被馏分收集器收集到。 实际情况下，这是做不到的，因为存在一个延迟体积。 延迟体积：检测池到馏分收集器之间管路的体积。 后运行时间：是指分析物组分从检测池到馏分收集器所用的时间。 为了准确地触发馏分收集器的启动和停止，必须测定后运行时间。后运行时间可以转换成与流速无关的延迟体积。 后运行时间测定方法之一： 通过在流路内注射一种染料，当馏分收集器针尖出现该染料时记录时间。 后运行时间＝t馏分收集器- t检测器 后运行时间测定方法之二： 在馏分收集器内装入一个检测器，该检测器称为延迟传感器。将延迟校正物注入流路，两个检测器都记录信号。两个检测器之间的时间差就是后运行时间。 根据校正时所用的流速，系统将自动计算出准确的延迟体积，并保存，同时也能计算出每个流速下的后运行时间，当流速改变时，不需要再校正后运行时间。 扩散使峰（谱带）变宽 ，严重削弱了色谱的分辨（分离）能力。 谱带变宽与流速成反比，与管线长度和管线内径成正比。 三种不同管径的扩散影响 所以，制备液相色谱中更应注意缩短管路的长度，减少不必要的死体积。 各种类型的制备液相展示 * 酶、蛋白和其他生物分子；－－－微克 生物和生化测试以及合成反应副产物、生物药代、天然产物－－－－毫克 对照品（分析标准）、毒