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凝血四项检查.
凝血四项检查
【检验原理】
37℃下，在待检血浆中加入APTT试剂，即以脑磷脂作为血小板的替代物加入贫血小板血浆中，在Ca2+的参与下，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，即为待测血浆的APTT。
【样本制备】
1.采血与抗凝：采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：1。
2.离心：抗凝血以2500xg离心10分钟，用微量移液器吸出待测血浆。
3.保存：血浆样本应立即测试。22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。
【检验方法】
1.仪器预热：开机，按照仪器使用说明书预热，达到要求稳定温度，进入正常工作状态。
2.试剂配制：严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，将试剂瓶直立在18～25℃中静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。氯化钙用前应放入仪器37℃预温槽。
3.正常质控血浆制备：按照质控血浆试剂盒使用说明书。
4.测定：以半自动高性能血凝仪为例：
①将测试杯置于预温槽中，用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。
②试剂放相应位置，37℃预温，需混匀放搅拌子。
③将待测血浆100?l（患畜或者质控血浆）加入测试杯，再将APTT试剂100?l加入测试杯，混匀，启动预温时间计时，37℃，5分钟，将测试杯从预温槽移至测试槽。
④使用联动加样器加入氯化钙100?l，仪器自动启动计时器开始计时并自动打印结果。
【正常值参考范围】
犬：10.0～18.0秒，建议各实验室建立自己的正常值参考范围。
【检验结果解释】
APTT延长见于ＦⅧ、ＦⅨ、ＦⅪ血浆水平减低。APTT缩短见于高凝状态、血栓性疾病。口服避孕药会影响检测结果。
PT
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【检验原理】
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在待检血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子，使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，即为待测血浆的凝血酶原时间（PT）。PT与血浆中的外源性凝血因子含量呈负相关。
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【样本制备】
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1.采血与抗凝：采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：1。草酸钠、EDTA、肝素不适于作抗凝剂。
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2.离心：抗凝血以2500xg离心10分钟。
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3.保存：血浆样本应立即测试。22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。如不能立即测试，应采样后60分钟内分离血浆。
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【检验方法】
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1.仪器预热：开机，按照仪器使用说明书预热，进入正常工作状态。
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2.试剂配制：严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，将试剂瓶直立在室温中静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。
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3.正常质控血浆制备：按照质控血浆试剂盒使用说明书。
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4.测定：以半自动高性能血凝仪为例：
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①将测试杯置于预温槽中，用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。
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②试剂放相应位置，37?C预温，混匀需放搅拌子。
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③将待测血浆100?l（患畜或者质控血浆）加入测试杯。
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④启动预温时间计时，37℃，3分钟，将测试杯从预温槽中移至测试槽中。
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⑤使用联动加样器加入试剂100?l，仪器自动启动计时器开始计时进行测试。记录结果。
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【正常值参考范围】
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犬：5.0～15.0秒，建议各实验室建立自己的正常值参考范围。质量控制程序：实验室应建立质量控制程序，使用质控血浆测定。
FIB
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【检验原理】
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在待检稀释血浆中加入高浓度的凝血酶，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，在以参比血浆制作的标准曲线上查得待测血浆的纤维蛋白原浓度，即为待测血浆的纤维蛋白原（FIB）含量。
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【样本制备】
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1.采血与抗凝：采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：1。
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2.离心：抗凝血以2500xg离心10分钟。
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3.稀释：用咪唑缓冲液按照1：5比例稀释血浆。
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4.保存：血浆样本应立即测试。22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。
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【检验方法】
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1.仪器预热：开机，按照仪器使用说明书预热，进入正常工作状态。
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2.试剂配制：严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，并放室温静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。
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3.定标血浆制备：以蒸馏水复溶血浆，加入量标识在试剂瓶上。
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正常质控血浆制备：按照质控血浆试剂盒使用说明书。
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4.FIB标准曲线制备：以半自动血凝仪为例：
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①按下表稀释标准血浆（假设FIB标定液浓度2.57g/L）：
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比例 标准血浆（?l） 咪唑缓冲液（?l） 总体积（?l） FIB浓度（g/L） 1:5 100 400 500 5.14 1:10
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