线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理.docVIP

Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。 苏铁木精英文别名Janus green；Diazine green；Diazine green S 。 化学式：C30H31N6Cl定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。 詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态即有色状态呈蓝绿色而在周围的细胞质中染料被还原成为无色状态 必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。 Cas 编号: ?2869-83-2 EINECS 编号: ?220-695-6 MDL 编号: ?MFCBeilstein 编号: ? 分子式: ?C30H31ClN6 分子量: ?511.06 中文别名: ? 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物 英文别名: 　 3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium chlorideDiazin Green SUnion Green BC.I. 11050 性状: 　 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。常用作线粒体专一性活体染色剂.线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态. 用途: 　 用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂。 贮存: ?密封干燥保存。 联合国编号: ? Risk: ? Safety: ?S24/25 Hazard: ? 小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察 1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。 2. 实验用品： （1） 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双凹载玻片 （2） 实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液 （3） 实验材料：小鼠 3. 实验原理： （1） 活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。这种染色方法常用的是化学染料。 目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。 应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。 （2） 通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。 （3） 选择活体染料的原则： ① 性质：有电化学特性 ② 低毒、无毒 ③ 低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹纳斯绿B染液 ④ 专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色 ⑤ 常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。 4. 实验步骤： （1） 用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，取出肝脏。选取边缘较薄的肝组织0.5cm2放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。 （2） 滴加1/5000的詹纳斯绿B染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。以组织边缘被染成蓝绿色为准。 （3） 吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。滴加Ringer液约0.5mL，用剪刀充分剪碎组织制成悬液。 （4） 静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。 5. 实验结果：视