在职研究生分子生物学部分课后思考题..docx

《基因组学与后基因组学》说明人的基因组成或结构变化所引起的相关疾病。要求：1、特定某个基因名称、定位、大小及组成等基本特征。2、基因组成或结构变化的过程、结果和表型。《细胞信号转导》1、请叙述肝细胞对胰高血糖素或肾上腺素的反应过程。举胰高血糖素的例子：胰高血糖素与受体结合受体蛋白分子发生构象上变化受体与G蛋白αs亚基结合α亚基与GDP亲和力下降 与 GTP亲和力增加，GTP置换GDP-α亚基变构，α与β、γ分离，同时α与受体分离（G蛋白至功能状态）-活化的G蛋白与AC结合，激活之-AC催化ATP分解形成cAMP（第二信使）cAMP活化cAMP依赖性蛋白激酶A（PKA）使靶蛋白磷酸化-肝细胞糖原分解、糖异生、减少对葡萄糖的利用。2、细胞膜在信号转导的过程中起到怎样的作用？细胞通过位于胞膜或胞内的受体感受胞外信息分子的刺激，经复杂的细胞内信号转导系统的转换而影响其生物学功能，这一过程称为细胞信号转导，这是细胞对外界刺激做出应答反应的基本生物学方式。其中，水溶性信息分子如肽类激素、生长因子及某些脂溶性信息分子(如前列腺素)等，不能穿过细胞膜，需通过与膜表面的特殊受体相结合才能激活细胞内信息分子，经信号转导的级联反应将细胞外信息传递至胞浆或核内，调节靶细胞功能，这一过程称为跨膜信号转导。其过程包括：①胞外信号被质膜上的特异性受体蛋白识别，受体被活化；②通过胞内信号转导物(蛋白激酶，第二信使等) 的相互作用传递信号；③信号导致效应物蛋白的活化，引发细胞应答(如激活核内转录因子，调节基因表达)。脂溶性信息分子如类固醇激素和甲状腺素等能穿过细胞膜，与位于胞浆或核内的受体结合，激活的受体作为转录因子，改变靶基因的转录活性，从而诱发细胞特定的应答反应。细胞信号转导异常与疾病细胞信号转导异常：是指由于信号转导蛋白量或结构的改变，导致信号转导的过强或过弱，并由此引起细胞增殖、分化、凋亡或机能代谢的改变。受体的缺陷重症肌无力（myadstheniagravis）：??患者体内产生了抗乙酰胆碱受体的抗体??抗体与乙酰胆碱受体结合，封闭乙酰胆碱，并促使乙酰胆碱受体的分解??患者体内受体的数目明显减少??通过乙酰胆碱受体进行的信号转导过程障碍，而出现病症。G蛋白功能异常??霍乱：霍乱弧菌附于小肠粘膜进行繁殖而引起的急性腹泻??霍乱弧菌产生的霍乱毒素，可与Gs的α亚基结合??α亚基丧失了GTP酶活力，不能将GTP水解成GDP??Gsα处于不可逆激活状态,不断刺激AC生成cAMP,胞浆中的cAMP含量可增加至正常的100倍以上??导致小肠上皮细胞膜蛋白构型改变，大量氯离子和水分子持续转运入肠腔，引起严重腹泻和脱水。肢端肥大症和巨人症??垂体腺瘤：分泌生长激素（GH）过多??编码Gsα的基因突变（30~40%）：Gsα的精氨酸201被半胱氨酸或组氨酸取代; 或谷氨酰胺227被精氨酸或亮氨酸取代??突变抑制了GTP酶活性，使Gsα处于持续激活状态，cAMP含量增多，垂体细胞生长和分泌功能活跃。先天性肾源性尿崩症(CNDI)－遗传性疾病主要症状：肾脏集合管对抗利尿激素不起反应而致尿浓缩障碍，出现多饮、多尿和尿比重降低。患病的婴儿的肾脏缺乏产生终尿的能力，他们会遭受到严重的脱水。慢性的的脱水会引发智障碍、生长迟缓、甚至是死亡.1、试述外源基因在原核体系中的表达需要具备的条件，及影响外源基因表达的因素。条件：编码区不含插入序列；（mRNA-cDNA）位于启动子下游，方向一致，原有的读码框不变；含起始密码子、终止密码子； 转录出的mRNA必须有SD序列，调整SD序列与第一个AUG间的距离（因为会对转译效率有影响）；产物比较稳定（如：融合蛋白、信号肽）；选择系统偏好的简并密码。影响因素：启动子的强弱（主要因素） 基因的剂量RNA转译效率（SD互补、AUG-SD距离及序列、AUG前后核苷酸序列的适宜性）密码子表达产物的大小产物的稳定性2、蛋白质的分离纯化技术依据蛋白质的性质分为哪几大类，请列举其中的一类，谈谈它的原理及应用。分类溶解度差别：如：硫酸铵沉淀法分子大小不同：透析、超过滤、离心、凝胶过滤（分子筛层析）蛋白质分子带电性质不同：电泳、离子交换层析蛋白质吸附性质不同：根据蛋白质吸附性质不同的分离方法。原理：利用不同的蛋白质被吸附剂吸附的强弱不同，在洗脱中吸附弱的物质先被洗脱，吸附强的后被洗脱。吸附剂①无机（活性炭、硅胶、氧化铝）②有机（淀粉、聚酰胺凝胶、纤维素）。类型：吸附柱层析、吸附薄层层析。应用：可用于纯化生命物质、分离蛋白质亚基、浓缩溶液等。蛋白质的特异性配体3、以人GM-CSF为例，写出获得该基因工程重组蛋白纯品的流程。技术路线-表达载体的构建、 外源基因片段的分离-表达性重组体的构建-转化宿主菌-诱导表 达-表达产物的鉴定-表达产物的分离-对粒细胞作用的体内外