基因重组分析软件RDP4分析演示..docxVIP

要分析一个重组事件，首先需要一些基础软件的支持，其中最重要的是mega。打开一个.meg格式的文件：左击鼠标open按钮。点击页面顶端options按钮，进入General页面选择一系列参数：选择你的序列是环状还是线性，检测所需要的方法，建议选择默认的选项（RDP, GENECONV and MAXCHI）你选择的方式越多，消耗时间越长。如果你分析的是小型数据（小于50个序列），你还可以选择CHIMAERA，BOOTSCAN 和SISCAN 。一般不使用LARD方法，除非在验证重组时间或检测小于20个序列的数据时。再看右边的选项，在你第一次分析数据时，应该选上disentangle overlapping events选项，如果分析时卡住了再取消分析，把这个选项删掉就可以了。其他选项选择默认就可以了一旦所有选项都调试好之后，左击主界面上的X-over按钮开始进行重组分析。如果你认为耗费的时间超出了你的预期，你可以点击stop按钮，如果你不想分析其中的某个序列，可以点击Sequence display界面中右侧序列的名字，左击一下名字变灰，为mask这个序列，即对这个序列不进行重组分析，但依然作为参考序列在做树中显示出来；左击两下名字变白，disable这个序列，即完全除去这个序列。这样的处理可以提高分析重组的能力，集中精力分析你需要的序列。分析完毕后出现四个界面，顺时针方向依次为Sequence display，The recombination information display.，Schematic sequence display以及 Plot display。下面分四个部分具体讲解。The Sequence Display：左击序列中的部位可以显示不同颜色代表的含义鼠标悬空在某个核苷酸上会显示出该核苷酸处于何序列的具体位置。右击鼠标可以保存不同形式你想要的序列。Save entire alignment.：保存整个比对结果，可以保存成多种形式。Save alignment with recombinant sequences removed：保存没有重组序列的比对结果。即在plot display 板块中为一个完整的长条的序列。Save alignment with recombinant columns removed.：将去除所有与重组相关的序列，如果一个比对结果中与重组相关的序列太多，很可能结果是一个空白或接近于空白。Save alignment with recombinant regions removed.：所有与重组相关的核苷酸将被取代为—或.Save alignmnet with recombinant regions seperated.:重组序列将被分割成两部分，一部分与重组无关，一部分是重组部分。可以分别与其他序列进行比对。Split alignment into common mosaics.：具有同一重组镶嵌体的序列和其余的非重组序列被分裂为两个单独的比对结果。Save only enabled sequences.：只有被enable的序列才会保存。这个选项有助于手动将同一组的序列保存成新的比对结果。Save only disabled sequences.：只有mask和disable的序列被保存下来如果你想单独分析某一组序列，右击鼠标选择select groups，点击你想选择的序列，变为蓝色即为选中，未选中的为黑色。如果你想专门看某个序列，右键点击go to ，然后在schematic sequence display中会显示这个序列。5、The Recombination Information Display 这些信息包括用于检测的方法,重组事件的编号,可能的断点,序列的名字,可能的突变位点，与该重组毒株密切相关的,可能父母代的序列名字(主要和次要的父母)和次要父母代毒株比主要父母代毒株与重组序列的关系更密切的概率，以及P值的大小。如果出现以下情况，该界面还会出现warning标示（红色）：（1）在比对序列中只有一个可能为父母代毒株的序列（2）有可能(约30%或更大的可能)误认为重组序列(即实际上父母代的序列中的某个才是真正的重组毒株)如果是这样会在后面显示出实际上可能为重组毒株的父母代毒株的名字。（3）无法识别出一个或全部两个突变位点。（4）一个或两个突变位点是错位的。（5）重组信号微弱（6）如果复合信号可能是一个分析错误的人工制品。“confirmation table”部分表明了用不同方法检测出发生该重组事件的毒株数和关于目前检测到的重组事件的符合程度Confirmation table 下面是一个总结性的柱状图，对于99%的用户来说前三条柱状图代表的是有用的