干细胞在骨衰老..docVIP

项目名称： 干细胞在骨衰老与再生中的作用及关键信号分子调控 金岩 中国人民解放军第四军医大学 2011.1至2015.8 总后勤部卫生部  : 1. 阐明骨发育、衰老和再生修复中相关干细胞分化的关键基因和信号通路调控，明确干细胞在骨再生修复中动员、定向分化和归巢中的作用及其分子机制， 2. 明确骨增龄和衰老过程中相关干细胞的生物学行为变化规律以及干细胞在成骨-破骨平衡中的作用及调控机制，阐明增龄及衰老中关键信号通路及微环境对干细胞成骨分化的调控。 3. 明确基因敲除、去势骨疏动物模型和骨质疏松患者相关干细胞生物学行为变化特点及调控机理，阐明不同性激素水平对干细胞成骨功能的影响，确定干细胞在骨质疏松发病中的关键作用。 4. 对比不同来源干细胞治疗骨质疏松的效果；建立应用小分子化合物预防和治疗骨质疏松的方案；应用干细胞与组织工程技术治疗骨质疏松状态下的骨缺损。 5. 发表具有较高影响因子的代表性SCI论文20-40篇；申请发明专利5～10项；培养博士后10～20人，博士40～60人，硕士20～40人；争取1～2人获得全国百篇优秀博士论文；吸引国外优秀的学者和留学博士回国工作。  三、研究方案 总体研究思路： 骨在发育、增龄、衰老和受损后的再生过程中始终保持着组织动态变化的特点，以往研究多侧重于终末分化细胞的功能研究，缺乏系统的网络调控研究，且主要对成骨细胞、破骨细胞这两种效应细胞展开研究，而对其上游的干细胞关注甚少。项目组前期工作显示干细胞在上述过程中扮演了至关重要的角色，同时干细胞功能受到严密的分子调控，当关键分子调控途径产生异常时，常引起干细胞功能受损从而导致骨组织发育不良、早衰或由衰老引起的骨质疏松、骨损伤愈合与再生修复能力下降等表型。因此，干细胞是探讨骨组织相关重大疾病防治策略的重要靶标，阐明干细胞在骨发育和衰老过程中的重要角色，及其在骨组织再生修复中发挥的作用和机制，不仅能为深入认识人体器官发育提供理论依据，而且将提供新的组织退行性病变的防治策略。本项目拟应用模式动物，以骨发育、衰老和再生不同阶段的相关干细胞研究为切入点，探讨干细胞在上述过程中关键信号通路变化规律及机制；阐述干细胞生物学功能改变在骨质疏松发病中的重要作用；在此基础上建立骨质疏松预警方案及基于调节干细胞功能的治疗策略；确定工程化策略在骨折和骨缺损环境中的再生治疗模式。 技术路径： 可行性分析： 1. 理论和方法可行： 干细胞在骨的发育、衰老和再生过程中扮演着至关重要的角色，而在此过程中干细胞受到复杂的各种信号分子的网络调控，是决定其介导的骨生理病理表型的关键因素。本项目组基于基因敲除小鼠的前期研究揭示了老龄性骨质疏松与骨髓间充质干细胞功能不良相关，证明一些关键基因在骨髓间充质干细胞的成骨向分化中起重要作用，其缺失可导致骨质疏松疾病发生。在骨修复再生方面，本组以不同来源的间充质干细胞作为种子细胞，运用组织工程技术成功修复多种类型的大动物骨组织缺损，证明了利用干细胞进行骨质疏松性骨损伤的再生修复的可行性。而现代生物技术尤其是细胞、分子生物学的发展为我们阐明此调控网络提供了成熟有效的方法体系，本组具有的条件性基因敲除/入、RNAi、高通量小分子化合物筛选平台等都为本项目的实施打下基础。 2. 拥有多种模式动物作研究模型： 本项目组成员长期从事骨发育再生的研究，已建立一批转基因动物模型，如Cre-ERT;PtenCO/CO小鼠表现出骨发育不良， Zmpste24-/-小鼠出现早衰表型，MT1-MMPPRX-CO/PRX-CO小鼠出现骨密度降低和代谢异常，为在分子、细胞、组织和个体水平研究关键基因和信号通路在相关成骨干细胞中的作用提供有力工具。此外，本项目组还拥有多种稳定的发育和再生修复实验动物模型:如BMP信号通路(Bmpr1a激活或敲除模型)Bmpr1aCO/CO条件打靶小鼠, 低氧诱导因子信号通路Hif1aCO/CO和 VhlhCO/CO条件打靶小鼠，Pten/PI3K信号通路PtenCO/CO条件打靶小鼠，以及Cre-ERT, OC-Cre, Col2-Cre-ERT, Col2-Cre等工具小鼠。此外，Calponin完全敲除小鼠已拿到嵌合体。另外，还可利用成熟方法制备的去势动物以及自然增龄衰老的动物模型开展相关研究。 3. 有前期研究工作基础： 在干细胞分化调控机制的研究方面，本组发现通过上调Klotho和胰岛素样受体I使受体鼠的寿命延长和增龄性变化特征的减弱，从机制上阐释了BMSC诱导形成骨髓的功能，并为增龄性疾病的治疗提供了新的思路和策略(Blood, 2009)。证明利用过表达端粒酶基因可增强BMSC体外和体内的骨组织形成能力(Nat Biotechnol, 2002)。在细胞功能调控机制研究方面，