人教版高中生物选修一5.3《血红蛋白的提取和分离》优教课件 （共32张PPT）.pptVIP

1、 凝胶色谱柱的制作 打孔→挖穴→安管→覆网→纱包→插管 2、凝胶色谱柱的装填 固定色谱柱→配凝胶悬液→装填色谱柱→洗涤平衡 3、样品的加入和洗脱 调节缓冲液面→滴加透析样品→样品渗入凝胶床→洗脱→收集分装蛋白质 （二）凝胶色谱操作 样品的加入和洗脱 1.调液面 2.加样 3.再调液面 4.洗脱 5.收集 缓冲液 凝胶 1.红细胞的洗涤： 洗涤次数不能过少；低速、短时离心。 2.色谱柱的装填： 装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液 不能断流。 3.凝胶的预处理： 沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡 4.色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。 注意事项 　　在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 　　使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究。 思考 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。 　　你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？ 思考 结果分析评价 3 　　观察你处理的血液样品离心后是否分层？若分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，得不到纯净的红细胞，影响后续