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探讨整合素β1在小鼠慢性心肌炎中的作用摘要： 目的 观察整合素β1(CD29)在慢性心肌炎小鼠心肌的表达，探讨其在慢性心肌炎中的作用。方法 猪心肌肌凝蛋白致Balb/c小鼠自身免疫性心肌炎模型，观察并记录免疫小鼠发病情况，同时用免疫组化SP法检测CD29在心肌的表达变化。 结果 实验早期(初次免疫后14、30 d)，小鼠心肌淋巴细胞浸润较明显，CD29在心肌的表达高于正常组(P 关键词： 整合素β1; 慢性心肌炎;心肌肌球蛋白 扩张型心肌病(DCM)是导致心力衰竭的常见病因，其病因和发病机制目前还不十分清楚,且尚无有效治疗手段。近年来自身免疫学机制在该病发病中的作用日益受到重视〔1〕。整合素β1(CD29)是整合素家族中的一员，它在炎症反应、细胞的增殖、分化，组织的修复、凋亡及基因表达的调节上起着重要作用。本研究通过检测CD29在慢性心肌炎小鼠心肌的表达情况，探讨其在心肌炎及DCM发生及发展过程中的作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 近交系Balb/c小鼠(武汉生物制品研究所，雌雄不限)，4周龄，16～20 g，按随机原则分为实验组和对照组。 　　1.2 肌凝蛋白的制备及免疫 心肌肌凝蛋白用猪心室肌制备，主要参照文献〔2〕。将肌凝蛋白溶于0.14 mol/L磷酸钾缓冲液中，终浓度1.0 mg/ml,然后与等体积完全弗氏佐剂(Sigma公司)混合研磨成乳浊液，在实验组小鼠双侧腹股沟、腋部皮下及足垫皮下注射，每只小鼠注射肌凝蛋白量为1 mg 。对照组仅用等量的0.14 mol/L磷酸钾缓冲液与等体积完全弗氏佐剂混合液在相同位置注射。免疫时间为第1、7、30天。分别在初次免疫后第14、30、60和120天处死小鼠前，称取小鼠的体重及心脏重量，并计算二者比值。 　　1.3 病理检查 心脏离体后，以10%甲醛固定，石蜡包埋后切片，部分做常规HE染色，显微镜下观察，余下切片待做免疫组织化学检测。 　　1.4 免疫组化SP法 将石蜡切片脱蜡及抗原修复，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗后，加3 ml/L过氧化氢处理10 min;再以PBS冲洗后，依次滴加正常羊血清(室温30 min)，大鼠抗小鼠单克隆抗体(Biolegend公司)(1∶200)(37℃孵育60 min,PBS洗)，生物素标记的兔抗大鼠IgG(中山公司)(1∶40，37℃孵育30 min，PBS洗)，以二氨基联苯胺(DAB)显色、苏木素衬染，然后常规脱水、透明、封片，镜检观察结果，呈棕黄色者判为阳性。采用HPIAS 2000型图像分析软件统计阳性率。 1.5 统计学处理 实验数据以x±s表示，组间比较采用t检验，采用SPSS12.0软件进行统计分析。 　　2 结 果 　　2.1 小鼠心脏重量与体重比值 与对照组比较，初次免疫后14 d实验组小鼠心脏重量与体重比值无显著变化(P0.05);而在免疫30 d后，实验组小鼠心脏重量与体重比值明显增加(P　　2 Murukami U，Uchida K，Hiratsua T,et al.Cardiac myosin from pig heart ventricle purification and enzymatic properties〔J〕.Biochemistry，1976;80(3)：611　　3 Fougerolles AR，Sprague AG，Nickerson County economic work conference leadership speech:The main task of the twenty-six session of the six plenary meeting of the county the county economic work conference this time, by the partys eighteen and eighteen Third Plenary Session of the spirit as a guide, carry out and implement the central and provincial economic work conference on rural work conference and the three session of the seven plenary session of the party to expand the spirit of the meeting, the total summary of last year the work, analysis of the current situation, the deployment of this work, furt