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SRTP结题论文论文题目：骆驼下丘脑组织中褪黑素受体MT1基因的克隆和测序学 院 动物医学院 专 业 动物医学 年级班级 08级1班 姓 名 胡国明指导教师 张 勇胡 俊 杰目 录摘要1关键词1背景及意义11 实验材料21.1 仪器与试剂21.2 采样22 实验方法22.1 提取总RNA22.2 反转录（RT），获得总的CDNA42.3 设计引物，进行PCR 42.4 用凝胶电泳的方法检测扩增片段 52.5 割胶回收目的序列，连载到载体并测序 53 实验结果与分析73.1 实验结果74 讨论7参 考 文 献8致谢8骆驼下丘脑组织中褪黑素受体MT1基因的克隆和测序胡国明（甘肃农业大学动物医学院08级 甘肃 兰州 730070）【摘要】目的 ：褪黑素（5-甲氧基-N-乙酰基色胺，MELeationin, MEL）主要是由松果体和视网膜分泌的一种吲哚类激素，广泛存在于多个物种的脑脊髓液和外周血液中，主要分布于动物的下丘脑、肾上腺等多个组织中。其在生物的昼夜节律，视网膜信号调节及季节性繁殖哺乳动物的生殖调控等方面具有重要的作用。本实验利用分子生物研究方法研究骆驼脑组织中的褪黑素受体基因，为进一步研究褪黑素对季节性繁殖动物的作用机理体提供基础。【关键词】：褪黑素、下丘脑、RT—PCR、褪黑激素受体、松果体、MT1基因【背景及意义】褪黑素（melatonin,Mel）是松果体分泌的一种神经内分泌激素，松果体分泌Mel具有昼夜节律，由下丘脑视交叉上核（supra-chiasmatic nucleus,SCN）控制，与自然界的光-暗周期的变化合拍。这种节律性波动表现为夜间达到高峰而白昼降至谷值，即Mel主要在夜间分泌。早在1917年，McCord和Allan发现了牛松果体提取物能使蟾蜍皮肤颜色变浅，首次揭示了松果体Mel的生物活性，标志着Mel研究的开始。1959年，皮肤病学专家Lerner分离纯化并确定了该物质的结构，将其命名为Mel，成为松果体研究史上的重要里程碑，揭开了对松果体Mel研究的序幕。此后，实验室先后报道了鸟和鼠脑类、胃肠、免疫器官及生殖系统均存在Mel受体。刘志民、赵瑛教授报告了人胚胎、心、肝、肾等组织及各种脑区存在Mel受体，提示人体各种器官是Mel作用的靶器官，为研究Mel作用年奠定了基础。1994～1995，Repper等克隆出哺乳动物Mel受体mt1和mt2亚型，标志着Mel研究进入分子生物学阶段。实践证明，褪黑素在促进母猪性成熟和山羊绒生长和水貂皮的生长、调节公猪的行为等各方面都有良好的效果，但对促进畜禽生长的最佳剂量、供给途径及时间等问题值得深入研究。考虑到动物在放牧状态下，其营养受季节性影响较大，而褪黑素可以起到与季节效应相似的调节动物行为的作用。因此深入研究褪黑素在动物体内的代谢及外源性褪黑素对畜禽生产的影响机理具有深远的理论意义和实际价值1 实验材料仪器与试剂超净工作台、超低温冰柜、离心机、离心管、PCR反应管、移液枪、电泳仪、PCR仪、紫外线检测仪、水浴锅RNAiso Plus、氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC处理水、5×PrimeScriptBuffer、PrimeScriptRT Enzyme Mix I、Oligo dT Primer(50uM)*1、Random 6 mers(100uM)*1、Total RNA、Rnase Free dH2O、Buffer DE-A、Buffer DE-B、Buffer W1、BufferW2、Eluent采样采取母骆驼的下丘脑组织，用液氮保存。2实验方法2.1 提取总RNA①将超低温冻结的RNA提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量）。对于普通的RNA 提取样品，可以向研钵中加入适量的RNAiso Plus ，将研磨成粉末状的样品完全覆盖，然后室温静置，直至样品完全融化，再用研杵继续研磨至裂解液呈透明状。②将匀浆液转移至离心管中，室温静置5分钟。③12，000g 4℃离心15分钟。④小心吸取上清液，移入新的离心管中（切勿吸取沉淀）。⑤向上述匀浆裂解液中加入氯仿（RNAiso Plus的1/5体积量），盖紧离心管盖，用手剧烈振荡15秒，（氯仿沸点低，易挥发，振荡时应小心离心管盖突然弹开）。待溶液充分乳化（无分相现象）后，再室温静置5分钟。⑥离