酵母菌杂交育种1答题.pptVIP

酵母菌杂交育种 目录 一酵母菌杂交特点 1酵母菌的细胞结构和菌落形态 2酵母菌的生活史和繁殖方式 3酵母菌的杂交 二酵母菌杂交育种的方法 标记菌株的选择 酵母菌杂交 拓展：酵母群体杂交育种方法 一酵母菌杂交特点 1酵母菌细胞结构和菌落形态 酵母菌（yeast）是低等真核微生物，分属于子囊菌纲、半知菌纲和担子菌纲。大多数酵母菌为单细胞，一般呈卵圆形、圆形或圆柱形。细胞结构类似于高等生物，细胞壁的主要成分为葡聚糖和甘露糖，此外还有蛋白质和脂类等。酵母细胞除细胞壁之外还有细胞核、核膜、核仁等结构。大多数酵母的菌落和细菌相似， 酵母菌的细胞结构与细菌相似，但比细菌细胞大得多。一个椭圆形的酵母菌细胞长约7.2um，宽5.6nm(圆形直径1—5um) . 菌落大而厚，菌落表面湿润、粘稠并多呈乳白色，少数为红色。 菌落特征 表面湿润、粘稠，大多数是乳白色，少数红色（红酵母），在固体培养基上生长时间长了，颜色变暗，呈绉缩状。 2酵母菌生活史和繁殖方式 酵母菌是真核生物中最简单的单细胞微生物 ，具有真核生物所有的共性，染色体结构、功能和高等生物细胞相类似。存在单倍体和二倍体的生活史，二倍体生活力强，生产能力高，可通过杂交得二倍体来育种。 酵母菌的生殖方式 　酵母菌可以进行无性生殖，也可以进行有性生殖。无性繁殖包括芽殖、裂殖(即少数种类的酵母菌与细菌一样，借细胞横分裂而繁殖)、芽裂(这种方式很少)三种。其中最主要还是出芽生殖(简称芽殖)，即成熟的酵母菌细胞先长出一个小芽体，芽体细胞长到一定程度脱离母细胞继续生长，而后形成一个新个体。有性生殖是以形成子囊孢子的方式进行。 3酵母菌的杂交 酵母菌的杂交最主要通过有性杂交，利用两种不同结合型的单倍体菌株或子囊孢子进行的。有的酵母如假丝酵母等不具有性生殖，即不产生子囊孢子，它们的杂交与霉菌一样，是通过准性生殖进行的。酵母菌杂交一般是指异接合型菌株杂交。杂交过程包括子囊孢子接触，结合，合子形成，直至二倍体细胞出牙为止的一系列过程。杂交步骤包括遗传标记菌株的选择和不同遗传标记的异接合型细胞杂交。 二酵母菌杂交育种的法 1 标记菌株的选择 常用的标记是营养缺陷型或抗性突变基因 1．营养缺陷型标记 2．抗性标记 3．温度敏感性标记 4．其他性状标记 如孢子颜色、菌落形态结构、可溶性色素舍量、代谢产物产量高低和代谢返速度快慢等，以及利用的碳、氮原种类、杀伤力等其他性状都可以作为重组体检出的辅助性标记。 酵母菌的杂交 诱导孢子形成的方法 将酿酒酵母菌株于YPD固体斜面上28℃培养48h活化，活化两次后接入产孢培养基，25℃培养3一7天，在显微镜下观察子囊孢子形成情况，计算一个视野内酵母总数和子囊孢子数，并计算产孢率。 产孢率(%)=子囊孢子数量/总细胞数 注：YPD 为酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基 酵母群体杂交育种方法 高耐性酿酒酵母的杂交育种 1.单倍体的制备 将酿酒酵母AY- 15, M1 分别于YEPD 液体培养基（见表一）中于28 ℃培养48 h, 离心洗涤, 弃上清液, 将酵母泥接种于微量元素培养基平板上, 于25 ℃培养5 d, 在显微镜下可以观察到有子囊孢子的形成, 收集平板培养基上的菌体。制备菌悬液 ( 106) , 用2 %的蜗牛酶于30 ℃水浴处理60 min, 然后于50 ℃水浴振荡处理10 min, 杀死二倍体营养细胞, 将粘连的孢子打散后 YEPD培养基（酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基） 用于酵母菌的培养 　　 配方：　　　表一　　 涂布YEPD 培养基平板, 挑取小菌落点接在生孢培养基上, 于25 ℃培养6d 后镜检, 不生孢子者为单倍体, 将单倍体分别挑至斜面, 统一编号, 于4 ℃下保存。 2. 单倍体接合能力及接合型的鉴定 将获得的单倍体菌株分别与标准a 型、α型菌株混合培养, 与a 型菌株形成哑铃形接合子的待测菌株为α型, 与标准α型菌株接合的待测菌株为a 型, 与a 型、α型菌株均不接合的为不育型菌株。 3.单倍体菌株的筛选 取装有麦汁的试管( 内装杜氏管) , 加入无水乙醇,使麦汁中酒精含量为16 %, 混匀。将AY- 15 的单倍体菌株分别接入麦汁中, 于30 ℃培养, 根据产气情况判断酵母的耐酒精性能, 选出耐性好的菌株。然后利用TTC平板进行复筛。菌株点接到TTC 平板下层培养基上, 于30 ℃培养2～3 d, 待菌落长大后, 倒入TTC 上层培养基, 覆盖原有的菌落, 在30 ℃下避光培养2～3 h, 由菌