第13章-细胞衰老与凋亡分析.ppt

细胞色素c诱导的凋亡细胞DNA电泳图 1．细胞色素c诱导0 h 2．细胞色素c诱导1 h 3．细胞色素c诱导2 h 4．细胞色素c诱导3 h 5．细胞色素c诱导4 h 6．阴性对照 7．Marker 有关细胞凋亡的研究表明，细胞色素C与细胞凋亡有关，从线粒体中泄露出的细胞色素C有诱导细胞凋亡的作用。 细胞凋亡的检测 ◆形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察。 ◆DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带。 ◆TUNEL测定法，即DNA断裂的原位末端标记法。能对DNA分子中3’-OH断裂缺口进行原位标记。 ◆彗星电泳法（comet assay）。 ◆流式细胞分析。 经相差显微镜观察，细胞经羟自由基（·OH）处理后，逐渐变圆，失去与周围细胞的联系，而最终从瓶壁脱落下来；而对照组显示正常的细胞形态。 ?? 彗星电泳法（comet assay）的原理是将单个细胞悬浮于琼脂糖凝胶中，经裂解处理后，再在电场中进行短时间的电泳，并用荧光染料染色，凋亡细胞中形成的DNA降解片段，在电场中泳动速度较快，使细胞核呈现出一种彗星式的图案，而正常的无DNA断裂的核在泳动时保持圆球形，这是一种快速简便的凋亡检测法。 hoechst33258染色：细胞发生凋亡时，染色质会固缩。所以Hoechst染色时，细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 致密浓染的凋亡细胞 正常细胞核 凋亡细胞免疫荧