实验四培养基的配制与灭菌..docVIP

实验四 培养基的配制与灭菌 一、实验教学目标基本与要求 1、明确培养基的配制原理。 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。 3、熟悉准备微生物培养准备器械的方法 二、实验内容 1.　无菌移液管、无菌平皿，准备无菌水、棉塞（试管和在三角瓶）； 2.　配制五类菌培养基(细菌、放线菌、霉菌、酵母培养基，双歧杆菌厌氧培养基)、分装。(每人参与配制一种，但要求四种都会配) 3.　高压蒸汽灭菌，灭菌后摆放斜面； 4.　实验室常用消毒灭菌方法(示范)。 三、实验操作 （一）吸管的包扎与灭菌： 在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。 棉花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑）； 然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与报纸约呈60o角，并将右端多余的报纸打一小结。 （二）培养皿的灭菌：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。 （三）无菌水的制备 无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。 1.无菌分离试管水的准备 试管中装入4.5ml自来水，每组共准备12支，盖上塑料盖，包扎； 2.三角瓶无菌水的准备 三角瓶装入99ml水，共装3瓶，封口膜包扎，外包牛皮纸或报纸。 3.无菌玻璃珠的准备 三角瓶中装入玻璃珠，封口膜包扎，外包牛皮纸或报纸。 （四）培养基的配制： 1、标识 同学们先将试管和三角瓶贴好标签。注明培养基名称，组别，日期。标签粘贴位置在离管口1/3管身处。 注意：标签用记号笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。 2、培养基的配制程序 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量自来水，玻棒搅匀，加热溶解。 调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。 定容：将溶化的培养基倒入量筒中，补充水量至所需体积； 加琼脂溶化：加所需量的琼脂，加热融化并不断搅拌。 3、培养基配方 牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)（1组）（p275） 牛肉膏0.5克，蛋白胨1克， NaCl 0.5克，水100mL，琼脂 2g ， pH7.2～7.4 高氏一号培养基(常用的放线菌培养基)（2组）（p275） 可溶性淀粉2.0g， KNO300.1g ，K2HPO40.05g，MgSO40.05g，NaCl 0.05g，FeSO40.001g，水100mL，琼脂 2g ， pH7.2～7.4 马铃薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）琼脂培养基（3组）（p276） （用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基），其配方如下： 去皮马铃薯20g （或鲜豆芽10g），葡萄糖5g，自来水100mL ， 琼脂 2g ，pH 自然 。 察氏培养基(常用的霉菌培养基)（4组）（p276） 蔗糖3g，NaNO3 0.3g, KH2PO4 0.1g，KCl 0.05g，MgSO4 0.05g，FeSO4 0.001g，琼脂2g，自来水100mL ，pH 自然 。 两歧双坡杆菌1.1852培养基（5组）（p281） 大豆蛋白胨0.5g，胰胨0.5g，酵母提取物1.0 g，葡萄糖1g，CaCl2 0.02g，MGSO4 0.04g，K2HPO4 0.1 g，半胱氨酸盐酸盐0.05 g，蒸馏水100mL，pH7.2 培养基配制注意事项 （1）若培养基中含有牛肉膏、酵母膏等非固体培养基，将基置于另一小烧杯中去皮称量后，加入少量蒸馏水中加热溶化，再倒入搪瓷杯溶液中。 （2）如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。 （3）豆芽汁的制作：称取鲜黄豆芽，置于搪瓷杯中，加入配制水量，小火煮20-30min，纱布过滤，补足水分。 （4）调pH。要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。 （5）配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。 五、培养基的分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（1）斜面：装量为管长的1/4-1/5。（2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。（3）三角瓶：装量不超过容积2/3。 每组同学为全班每位同学制备1支斜面（约4ml，按30人计，共120ml） 配制本班同学每人两块平板（每板约10ml，按30人计，共600ml ） 每组同学共需