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天然药物化学设计 实验报告 题目： 槲皮素的提取及结构鉴定 学 生： 学 号： 院 （系）： 专 业： 指导教师： 2013年5月 1日 一、实验题目 槲皮素提取及结构鉴定 二、实验目的 2.1.1 了解中药有效成分的有关提取分离方法及其优缺点 2.1.2 比较槲皮素的相关提取分离方法，学会分析、选择提取方法 2.1.3 掌握槲皮素的提取分离方法 2.1.4 掌握运用光谱、色谱等方法鉴定槲皮素的结构 2.1.5 掌握黄酮类化合物的一般性质与提取方法 2.1.6 锻炼学生自己的实验设计能力与动手能力 三、基本原理 通过比较从槐米中提取槲皮素的各种方法，本实验决定采用碱溶酸沉法。利用芦丁中含有较多的酚羟基，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出芦丁结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素。用碱溶酸沉法提取芦丁, 芦丁再酸水解得到槲皮素的方法可得到高纯度的槲皮素。 芦丁结构式 芦丁在冷水中极微溶（1:10000），在沸水中微溶（1:200），在沸乙醇中略溶（1:60）；在碱性溶液中易溶，芦丁可溶于甲醇及乙丙醇，在氯仿、乙醚和苯中不溶 芦丁结构式 槲皮素结构式 槲皮素溶于热乙醇、冷乙醇、甲醇、乙酸乙酯、吡啶等；不溶于石油醚、苯、乙醚和氯仿，几乎不溶于水。 槲皮素结构 四、实验试剂 槐米300g、蒸馏水、石灰水、硼砂、浓盐酸、羧甲基纤维素钠（CMC）、乙醇、苯、甲苯、甲醇、甲酸、醋酸乙酯、3%三氯化铝乙醇液、槲皮素标准品、镁粉、1％FeCI3、Mg(Ac)2、 五、实验器材 电磁炉、烧杯、量筒、玻璃棒、温度计、PH试纸、研钵、电子天平、胶头滴管、钥匙、滤纸、抽滤瓶、 布氏漏斗、真空泵、水浴锅、电热套、铁架台、烘干机、圆底烧瓶、球形冷凝管、紫外分光光度仪、硅胶G板、紫外灯、玻璃试管、熔点测定仪、 六、自制与创新之处 考虑到从槐米中粗提取得到的芦丁中含有大量的糖类，黏度过大，所以粗过滤时不用减压过滤，自制过滤系统，及用矿泉水瓶的上部，在瓶颈处加塞纱布，倒扣与铁架台上，下面用烧杯接滤液，进行粗过滤。 七、实验流程 八、实验步骤 芦丁的提取 取槐米若干，加约6倍量水，煮沸提取，在搅拌下缓慢加入石灰水至 p H为 8～ 9 ， 然后加适量硼砂，在此 p H条件下煮 2 0～3 0分钟，不断补充蒸发掉的水分以保持PH值不变。趁热过滤， 残渣反复减压过滤 3次，合并滤液，在 6 0～7 0 摄氏度条件下， 用浓盐酸将合并液调至 p H为4至5，酸水液放置过夜，抽滤。用水将沉淀物洗至中性，6 0度干燥得芦丁粗品，用沸水重结晶，7 0～8 0摄氏度干燥后的芦丁纯品。 槲皮素的提取 芦丁的酸水解，称取芦丁若干，置适宜的圆底烧瓶中，按1﹕80加2％H2SO4，小火加热，微沸回流2h。溶液逐渐由澄清变浑浊，析出细小的黄色针状结晶。反应结束后，放冷，抽滤。取结晶，即粗品槲皮素，于适宜圆底烧瓶中，加95％乙醇同以上硫酸的量，加热回流使溶解，趁热抽滤，滤液转移至三角烧瓶中，取20倍量的蒸馏水稀释，放置析晶24小时，抽滤，得精制槲皮素。减压下于110。C干燥可得无水槲皮素，熔点313～314摄氏度。 槲皮素的鉴定 槲皮素的定性反应 (1)样品制备：取自制槲皮素约5mg，置25ml锥形瓶中，加10ml甲醇溶解，作为样品溶液。 (2)定性试验：取上述样品溶液约lml，分别置玻璃试管中，按下列方法进行试验，观察反应情况。 1)盐酸一镁粉反应：先加浓HCl约0．5ml，再加入镁粉适量，观察反应颜色。 2)FeCl3反应：加1％FeCI3，乙醇溶液1～2滴，观察反应颜色。 (3)用干燥精制槲皮素放置在熔点测定仪上测熔点。 槲皮素纯品的薄层色谱检查 （1）样品液制备：取自制槲皮素约5mg，置25ml锥形瓶中，加10ml甲醇溶解，作为样品溶液。 （2）对照夜制备：取标准槲皮素，加甲醇溶解作为标准对照品溶液。 （3）吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯 -醋酸乙酯 -甲酸( 5﹕4﹕1) 展开，3%三氯化铝乙醇液检识, 紫外灯( 365nm)观察。 （4）吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯－ 甲醇－ 乙酸( 35:5:5) 展开，3%三氯化铝乙醇液检识, 紫外灯( 365nm)观察 槲皮素的紫外吸收 把精制的槲皮素溶于甲醇制成溶液作为样品溶液，甲醇溶液作为参考溶液，用紫外分光光度仪测槲皮素的图谱