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现代生物技术在动物检疫中的应用 养殖 宋天增 201509510507 摘要：动物检验检疫主要检测内容包括动物疫病、兽药等有毒有害物质、特定动物源成份。本文简述了当前动物检疫的主要检测内容、传统常规动物检疫技术、核酸扩增技术在动物检疫中应用和新型生物技术平台技术在动物检疫中的应用。 关键词：动物检疫；传统检疫技术；现代检疫技术 动物检疫（Animal Quarantine）遵照国家法律运用强制性手段和科学技术方法预防或阻断动物疫病的发生以及从一个地区到另一个地区的传播，通常指动物防疫监督机构的动物检验检疫人员依法对动物、动物产品的传染病、寄生虫病进行检查定性和处理的行政执法行为。通过动物检疫，对可疑或已证实的疫病对象实行强制隔离，或作出适当处理，目的是防止动物传染病的传播，保障畜牧业生产和人民健康。 1动物检验主要检测内容 1.1动物疫病 动物疫病（含人畜共患疫病）由病毒、细菌、真菌、寄生虫、支原体、非常规病原（例阮病毒、立克次氏体）引起，在动物间或人与动物间传播，造成较严重危害的各种传染病。 我国进境动物疫病名录97种：一类病15种，二类病82种；含水生动物疫病11种。OIE关注疫病（手册2009）陆生动物疫病112种；水生动物疫病：25种。 1.2兽药等有毒有害物质 动物、动物产品、饲料中的兽药残留、重金属、微生物毒素、生物毒素等。兽药包括禁用药和限量用药，具体检测项目和控制标准根据进出口国家或地区的要求。 1.3特定动物源成份 疯牛病传播风险因子：饲料中的牛羊成分； 动物产品真伪鉴别：熟制肉类出口；珍贵皮草、珍贵中药材、濒危动物保护； 食物过敏源检测：甲壳素、某些鱼成份、转基因成分：例转基因鱼等。 2传统常规动物检疫技术 流行病学检疫时，对流行病的分析和确诊有至关重要的作用，但是流行病学的调查总结过程中也存在工作量大且繁琐，耗费的人力多等问题。 临床检疫方法具简便易行，适合现场操作等优点，但是临床检疫对发病初期尚未出现有病证意义的、特征症状的病例，或非典型病例，或症状相似病例，往往难于做出诊断。 病理学检疫技术既可验证临床诊断结果的正确与否，又可为实验室诊断方法和内容的选择提供参考依据。在剖解检疫时，有些病例往往缺乏特征性的病变，特别是急性死亡的病例、非典型病例和早期屠宰病例，所以在剖解检疫这些病例时应选择症状较典型、病程较长、未经治疗的自然死亡病例进行剖检。 病原学检疫时从病料中分离出病原微生物，虽是确诊的重要依据，但健康动物也有带菌现象，所以病原学的检疫结果还需与流行病学及临床诊断症状、病理变化联合起来综合分析。而且任何一种病原学方法都存在有漏检的可能，所以即使没有发现病原体，也不能完全否定该种传染病的诊断。 免疫学检疫技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好的检测、操作简单、快速等优点，是目前最理想的残留筛选性分析方法之一。但酶联免疫分析前期工作复杂，检测对象针对性太强，开发免疫检测试剂盒所需费用昂贵。 3现代生物技术在动物检疫中的应用 现代生物技术在动物检疫中的应用是基于分子生物学技术发展起来的分子生物学检测技术。根据生物大分子结构特点与相互作用原理，从分子水平检测某种特定生物大分子存在与否。 分子生物学检疫又称基因检疫，主要是针对不同病原微生物所具有的特异性核酸序列和结构进行测定。自1976年以来，基因检疫方法取得了巨大进展，建立了DNA限制性内切酶图谱分析、核酸电泳图谱分析、寡核苷酸指纹图核酸探针、聚合酶链反应等。 在动物检疫方面，具有代表性的技术主要有3大类： 核酸扩增技术： 蛋白质检测技术：蛋白质电泳与免疫印迹、重组抗原-based、单克隆抗体-based。 新技术平台：生物芯片、变性高效液相色谱、生物传感器。 3.1核酸扩增技术在动物检疫中应用 核酸扩增技术是对核酸进行体外生成和放大的技术，只要起始的生物材料里存在微量的特定核酸（如某种病原体的核酸），通过扩增反应就能得到大量的可检测到的特定核酸产物，从而可证明检测对象的存在。主要包括聚合酶链式反应（PCR)，实时荧光PCR，LAMP, NASBA核酸扩增产物分析技术测序、杂交、酶切等。 PCR与实时荧光PCR是发展成熟且主要应用的核酸扩增技术。 3.1.1 PCR检测 PCR技术用于动物检疫主要是检测病原，做早期诊断和病原的鉴定。它不仅可以检测活的病原体，而且还可检出已灭活的病原体，只要病原体的核酸未降解。因此，当由于各种原因无法进行病原分离和鉴定时，该技术将发挥巨大的作用。 常规PCR检测过程包括：取样、样品前处理与核酸提取-PCR反应，PCR产物电泳检测，PCR产物的确证分析（测序、酶切等）。 3.1.2 实时荧光PCR检测 实时荧光PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，每经过一个扩增循环，产生一个荧光信号，通过荧光强度变化监测产物量的变