小远志醇提物抗蛇毒活性初探..docVIP

小远志醇提物抗蛇毒活性初探 郁惠珍, 吴翚(1．健雄职业技术学院，江苏 太仓 2154；徐州师范大学化学系，江苏 徐州 221116) 通过比较小远志不同浓度乙醇提取物对眼镜蛇毒及蝮蛇毒中毒小鼠的保护作用来评价它们的抗蛇毒药效，发现95%乙醇提取物具有最佳抗蛇毒药效；继续对95%乙醇提取物的分段萃取部分（石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分）进行抗蛇毒活性筛选实验，发现乙酸乙酯萃取部分对中毒小鼠有较明显的保护作用。说明抗蛇毒活性成分可能是一种或多种中小极性物质，为临床应用有效成分的提取提供了依据，也减少了盲目性。 ：小远志；乙醇提取物；抗蛇毒活性  毒蛇咬伤属于突发的急性中毒事件之一。目前，世界上廉价蛇药供不应求，有着非常大的市场潜力，国内外对蛇药的研究极为关注[12]。 远志科植物小远志，性苦、微辛寒，分布云南[3-6]。药理学研究表明其具有清热解毒、祛风止痛、拔毒、生肌的功能[4]入药可治疮疖痈肿、小儿支气管炎、肺炎、咽喉炎、扁桃体炎等各种炎症胃痛、痢疾、跌打损伤、肋间神经痛等，对人体无毒，可内服或外用[3]。 在云南民间，用食用白酒浸泡小远志出色后，可马上用于治疗毒蛇、毒虫咬伤以及鼠、猫等的咬伤，数小时至数天内外擦可以消肿、止痛、解毒、不留后遗症甚至不留疤痕。可见小远志中含有较高的抗毒、消炎活性成分。目前有关小远志的研究报道很少[78 ]，对于其抗蛇毒药理研究尚未见报道。基于小远志的药用价值，我们对它的抗蛇毒活性进行了初步研究。我们以乙醇为溶媒对其抗蛇毒有效部位进行提取，重点讨论最佳溶媒和有效部位的筛选，为临床应用及进一步进行活性分子的提取和分离提供依据。 小远志全草醇提物的抗蛇毒活性通过对眼镜蛇毒及腹蛇毒中毒小鼠的保护作用进行评价[9]。 1 小远志全草不同浓度醇提物抗蛇毒活性筛选 1.1 材料与方法 1.1.1 试验材料 动物：18~25g清洁级ICR小白鼠0只，由南京大学生命科学院动物中心提供。小远志全草(海拔1 000 m) ,由云南省永善县中医院主任药师蔡大润鉴定(标本保存于云南省永善县中医院)。 受试药物：眼镜蛇毒、腹蛇毒（购自福建武夷山蛇类研究所）；95%、75%、55%、45%乙醇提取物的浸膏：取份小远志全草粗粉（20g/份），分别以200mL种浓度的乙醇浸泡24，过滤，浓缩，得四份浸膏2.95g、1.96 g、1.03 g、0.88g。1.1.2 小远志不同浓度醇提物对眼镜蛇毒中毒小鼠的保护作用 取5只18~25g的健康小白鼠，随机分为空白对照组、给药组（95%、75%、55%、45%乙醇浸膏组），每组15只编号。通过预试验，眼镜蛇毒皮下注射1.5mg/ kg，24h内小鼠死亡率可达90%~100%。因此，眼镜蛇毒对小鼠造模剂量定为1.5 mg/ kg，临用前以生理盐水为溶媒配制0.04%的溶液。各给药组分别按400 mg/ kg皮下注射不同浓度乙醇提取物的浸膏溶液（生理盐水配制），空白对照组给同体积生理盐水，20min后，小鼠皮下注射0.04%的眼镜蛇毒0.05mL/10g造模，观察各组小鼠24 h内死亡率。 1.1.3 小远志不同浓度醇提物对腹蛇毒中毒小鼠的保护作用 取75只18~25g的健康小白鼠，随机分为空白对照组、给药组（95%、75%、55%、45%乙醇浸膏组），每组15只并依次编号。通过预试验，蝮蛇毒皮下注射10 mg/ kg，24h内小鼠死亡率可达90%~100%。因此，蝮蛇毒对小鼠造模剂量定为10mg/ kg，临用前以生理盐水为溶媒配制成0.2%的溶液。各给药组分别按400 mg/ kg皮下注射不同浓度乙醇提取物的浸膏溶液（生理盐水配制），空白对照组给同体积生理盐水，20min后，小鼠皮下注射0.2%的蝮蛇毒0.05mL/10g造模，观察各组24 h内死亡率。 1.2 实验结果 表1 不同浓度乙醇浸膏抗蛇毒活性筛选实验观察结果乙醇浓度(%) 浸膏剂量 (mg/kg) 蛇毒种类 蛇毒剂量(mg/kg) 动物数(只) 死亡数(只) 局部症状 -- -- 眼镜蛇 2 15 13 伤口肿胀，内因呼吸衰竭而死 -- -- 眼镜蛇 1.5 15 11 95400 眼镜蛇 2 15 10 95400 眼镜蛇 1.5 15 2 75400 眼镜蛇 1.5 15 6 55400 眼镜蛇 1.5 15 13 45400 眼镜蛇 1.5 15 7 -- -- 蝮蛇 10 15 15 出血坏疽，肢全瘫，2.5h内死于呼吸衰竭 95400 蝮蛇 10 15 10 75400 蝮蛇 10 15 15 55400 蝮蛇 10 15 12 45400 蝮蛇 10 15 15 本实验由南京大学生命科学院帮助完成。表2 不