《生化产品检测与》的实验讲诉.docVIP

《生化产品检测与分析》的实验教案 1．直接滴定法测定豆奶粉中糖的含量 2．苔黑酚法测定RNA的含量实验一 直接滴定法测定豆奶粉中总糖的含量还原糖包括葡萄糖、果糖、麦芽糖。在测定还原糖时一般测定总糖时所有将糖类水解为转化糖再测定的方法都可用来测定还原糖。原理：将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀；沉淀很快与酒石酸钾反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀；这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点；根据样液消耗量可计算出还原糖含量。 ml），柄皿（100 ml），可调电炉，滴定管，移液管，漏斗 四．试剂 （1）??? 斐林氏A液称硫酸铜于ml容量瓶中并定容。 （2）??? 斐林氏B液称gNaOH溶入水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000 ml贮存于橡胶塞玻璃瓶内。 （3）0.1%甲基红指示剂：称取0.1g甲基红加60%的乙醇溶解并稀释至100ml放在滴瓶里待用。 （4）乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌加3 ml冰乙酸加水溶解并定容至100ml （5）10.6%亚铁氰化钾溶液 （6）6M HCl：量取50ml HCl加水稀释至100 ml （7）20% NaOH溶液 （8）1mg/mL葡萄糖标准溶液：精密称取1.000g经过98-100℃干燥至恒重的葡萄糖，加水溶解后加入5 ml盐酸并用水稀释定容至1000 ml。 五．操作步骤 1．样品处理：称取2.5g样品于50mL烧杯用100mL80℃的水分次溶解并倒入250mL容量瓶中，摇匀后慢慢加入5mL乙酸锌液和5mL亚铁氰化钾，摇匀后定容，静置半小时用干燥滤纸过滤，去初滤液，液备用。 2．糖水解后得样液：吸取50mL滤液于250mL容量瓶中加5mL6M HCl在68-70℃水浴中保温15min，冷却后加1滴甲基红指示剂用20% NaOH溶液中和至中性，加水定容作为待测液。 3．标定费氏试剂： 吸A、B液各5mlml，控制2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度滴加至蓝色刚好褪去为终点，记录下来，平行三份。计算出费氏试剂相当的葡萄糖含量（mg）吸A、B液各5mlml，控制2min内加热至沸→趁沸以先快后慢的速度滴加样液至蓝色变浅→正式滴定： 吸A、B液各5mlml，→加比预定量少1.0ml样液→2分钟内要求沸腾→计算： F：与10ml斐林氏试液相当的转化糖毫克数， V1：样品试液总体积 V2：样品试液滴定量 W：样品重量 7．思考题 （1）本法采用的澄清剂铜盐作为澄清剂碱性酒石酸铜甲液和乙液分别贮存必须在沸腾条件下进行样品溶液预测的目的 实验二 苔黑酚法测定RNA的含量 当RNA与苔黑酚(3，5-二羟基甲苯) 在沸水中加热时，RNA被酸降解，所产生的核糖进一步转变为糠醛，它与苔黑酚在高铁离子的催化下可反应生成绿色复合物，后者在670nm处有最大吸收峰，在10～100?g/mL范围内其吸光度值与RNA浓度有线形关系。 二、试剂和器材 1. 试剂 （1）标准RNA母液 准确称取RNA10.0mg，用少量水溶解（如不溶可滴加浓氨水，调pH7.0），定容至10mL，此溶液为1mg/mL。 （2）0.1mg/mL标准RNA溶液（配制10mL）； （3）苔黑酚-三氯化铁试剂（临用时配配制）：将100mg苔黑酚溶于100mL浓盐酸中，再加入100mgFeCl3·6H2O。 （4）10%硫酸溶液 （5）5%硝酸银溶液（配制50mL） (6)0.2%氢氧化钠溶液（配制50mL） 此外还有干酵母粉，无水乙醇，无水乙醚(500mL，分析纯）2瓶，乙酸干酵母粉烧杯有时絮状物出现较慢，可放置十几分钟。 样品的测定 将一定量的RNA粗品用水溶解并定容，RNA浓度在10～100?g/mL范围内，取1.0mL样液于6号试管中，加水1.0mL及苔黑酚-三氯化铁试剂2.0mL，沸水浴保温45分钟，冷却测A。根据标准曲线和稀释关系测的RNA的质量。 四.注意事项 样品蛋白质含量高时，应先用5％三氯乙酸沉淀蛋白质；有较多DNA样品时也会发生干扰，可在试剂中加适量的CuCl2·H2O， 可减少DNA的干扰。 五．思考题 鉴定中加入硝酸银的目的是什么?  实验三．气相色谱法测定食用酒中乙醇含量（内标法） 一　实验目的 1.了解气相色谱仪的基本结构； 2.学习和掌握使用氢火焰离子化检测器的基本操作； 3.掌握以内标法进行色谱定量分析的方法及特点； 4.学习气相色谱法测定乙醇含量的分析方法。 二、实验原理 气相色谱法是一种高效、快速而灵敏的分离