扬州市区主要河流革兰氏阴性菌污染情况调查..docVIP

扬州市区主要河流革兰氏阴性菌污染情况调查 班级：09环监（2） 研究小组：李珊珊、孔一涛、 刘碧玉、胡香、龚秀宽 一．前言 1．选题的实际应用价值及研究现状 水是生命之源，人类无法离开她而生存，然而当前水质污染令人堪忧，饮水安全无法保证。水又是微生物广泛分布的天然环境，无论是地表水还是地下水，甚至雨水或雪水，都含有多种微生物。根据细菌对氧的需求情况，可分为三大类：厌氧菌、兼性厌氧菌、好氧菌。当水体受到人、畜粪便、生活污水或某些工业废水污染时，水中厌氧菌和兼性厌氧菌等微生物的数量可大增。水环境研究显示我国70％以上的河流受到了污染，全国湖泊约有75％的水域受到显著污染，90％以上城市水域污染严重。因此，水中的细菌总数测定，特别是肠道细菌的检验，在环境质量评价、环境卫生监督等方面具有重要的意义。但是直接检查水中各种病原微生物，方法较为复杂，有的难度大，而且检查结果为阴性也不能保证绝对安全。所以，在实际工作中经常以检查水的细菌总数，特别是检查作为粪便污染的指示菌，来间接判断水体污染状况和环境卫生学质量。 常用的指示菌或其它指示微生物有：总大肠菌群、粪大肠菌群、粪链球菌、产气荚膜梭菌、双歧杆菌属、肠道病毒、大肠杆菌噬菌体、沙门氏菌属、志贺氏菌属、铜绿假单胞菌、葡萄球菌属、副溶血弧菌等。此外，还有水生的真菌、放线菌和线虫。 2. 本小组对题的构思及采用的研究方法 水中细菌总数测定操作过程： 1.实验准备 2.水样的采取、稀释 3.接种、倒平板、培养 4.菌落计数、报告 3.水中细菌总数测定操作过程需要的试剂和器材 1.试剂：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，灭菌水 2.器材：灭菌三角瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管，酒精灯，火柴，培养箱 4．可能遇到的困难和问题以及相应的解决办法和措施 问题和困难： 解决办法和措施： 1. 菌落计数不正确 使用菌落计数器 2. 操作过程培养基凝结 快速倒完且适量 3. 怎么做到无菌操作 在超净台上操作 4. 为什么培养基不凝固 调PH 5. 培养后观察不到细菌菌落 从头开始再操作 5．研究方法 本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 6．主要参考文献 1.陈玮，董秀芹.微生物学及实验实训技术[M]. 北京:化学工业出版社，2007 2.唐突.食品卫生检测技术[M]. 北京:化学工业出版社，2006 3.宋思杨，楼士林.生物技术概论[M].第2版. 北京:科学出版社，2005 4.教学教案本.贵阳医学院.2006 5.生物实验.无忧生物网.2007.02.15 6.基础型实验内容.实验教学中心.山东农业大学农业生物学.2005 7.中国仪器之家实验室常用方法资料[J].水中病原微生物.2005 8.徐飞，王开元，江迎春.水中细菌总数测定的优化研究[J].《今日科技》，第1期. 2007 二．实验操作 1.实验准备 ⑴准确称量药品：牛肉膏 0.3g蛋白胨 1g氯化钠 0.5g琼脂 2g ⑵.药品溶化：将5.1.1称量的药品进行溶化 ⑶.培养基调pH：将培养基PH调至7.0-7.2 ⑷.培养基过滤：使用纱布将培养基中的泡沫，沉淀物过滤 ⑸.培养基分装：将培养基分装到各洗净干燥的锥形瓶中 ⑹.盛放培养基的锥形瓶加塞：将锥形瓶加上橡胶塞 ⑺.锥形瓶包扎：使用纱布报纸包扎锥形瓶 2水样的采取、稀释 （一）水样的采集 河水或湖水：应取距水面l0～15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 (二)水样的稀释 ⑴.取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取lml水样注入第一管9ml灭菌水内、摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。 ⑵.若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。 3.接种、倒平板、培养 ⑴.仪器编号：所有要用到仪器全部编号 ⑵.水样吸取：用灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。 ⑶.平板制作：分别倾注约15mL己溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼