流式细胞分析技术..docVIP

流式细胞仪分析技术及应用 第一节 概述 一、工作原理 二、散射光的测定 三、荧光测量 四、细胞分选原理 第二节 数据的显示与分析 一、参数 二、数据显示方式 三、设门分析技术 第三节 流式细胞仪技术要求 一、检测样品制备 二、常用的荧光染料与标记染色 三、胶乳颗粒的应用 四、流式细胞技术的质量控制 第四节 流式细胞仪技术的要求 第五节、流式细胞仪的科研应用 第六节 流式细胞术在临床检测中的 主要应用 一、细胞周期和DNA倍体分析 二、染色体分析 三、细胞表面标志的检测 1、淋巴细胞及其亚群的分析 2、淋巴细胞功能分析 3、淋巴造血系统分化抗原及白血 病免疫分型 四、肿瘤耐药相关蛋白分析 五、AIDS病检测中的应用 六、自身免疫性疾病相关HLA抗原分析 七、移植免疫中的应用 流式细胞术(flow cytometry, FCM)亦称荧光激活细胞分选器(fluorescence-activated cell sorting, FACS):是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。 是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。 广泛应用于基础研究和临床实践各个方面，包括细胞生物学、肿瘤学、血液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等。 流式细胞术主要包括： 1、液流技术2、细胞的分选和计数技术3、数据的采集和分析技术 流式细胞术发展史: 1930年Caspersson和Thorell开始致力于细胞计数的研究 1934年Moldaven最早设想细胞检测自动化，用光电仪记录流过一根毛细管的细胞 1940年Coons提出结合荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白 1949年Wallace Coulter申请了在悬液中计数粒子的方法的专利 1950年Caspersson用显微UV-VIS检测细胞 1953年Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理，成功设计红细胞光学自动计数器 1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM发明第一台荧光检测细胞计 1972年Herzenberg研制出细胞分选器 1975年Kohler等提出单克隆抗体技术，为细胞研究提供大量的特异免疫试剂 大量厂家不断生产流式细胞仪 目前国内主要流式细胞仪厂家：Beckton Dickinson(BD)公司、BACKMAN COULTER公司 流式细胞术的特点： 流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选 细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量 主要特点 ：单个细胞水平分析； 多参数分析（同时多种荧光素标记）水平分析； 高灵敏度、高分辨率、高重复性、高分选纯度；可分析大量细胞；速度快： 5000-10000个细胞/秒；统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况； 分选感兴趣的细胞：血细胞、骨髓、组织培养细胞等。 第一节 概述 流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术。 流式细胞仪分为三大类： 一类为台式机（临床型）： BD FACSCalibur流式细胞仪特点：1、仪器的光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握。 2、两激光配置：488nm 633nm 3、 检测参数：四荧光参数 两个散射光参数 4、分析型流式细胞仪5、应用：细胞分析检测 第二类为大型机（科研型） 特点：分辨率高，可快速将所感兴趣的细胞分选出来，并可以将单个细胞或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或培养板上，同时可选配多种波长和类型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学研究应用。 第三类为新型流式细胞仪： 随着激光技术的不断发展，仪器选用2-4 根激光管，最多检测十三个荧光参数，加上散射光信号可达到15 个参数的同时分析。并且可以实现高速分选，速度达到50,000 个/秒，并可进行遥控分选，能够满足多种科学研究的要求。 BDFACSAria流式细胞仪： 高速分析分选流式细胞仪； 高速分析 ； 高速分选； 3根激光： 488nm 、 633nm、375nm结合特制高性能石英杯流动室； 应用：细胞分析分选、 sp细胞检测 流式细胞仪常检测的细胞特性 细胞组成 细胞功