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第一章 培养基制备设备 1-1 培养基的灭菌设备 教学目标 1、说出分批灭菌的定义及其优缺点 2、比较分批灭菌与连续灭菌的异同点 3、简述三种连续灭菌的工艺流程及其优、缺点 4、说出常用加热、维持、冷却设备的工作原理 灭菌:用物理或化学方法杀灭或除去物料或设备中一切有生命物质的过程。 一、培养基热灭菌动力学 1、灭菌对象:细菌的芽胞 2、无菌标准:1/1000 失败几率 3、灭菌时采用高温、短时间的方法 二、培养基制备中的常用灭菌设备 1、间歇式灭菌法中的常用灭菌设备 (1) 实罐灭菌(间歇灭菌;分批灭菌) :将配置好的培养基放在发酵罐中或其它装置中,,通入蒸汽将培养基和所有设备一起进行灭菌。 (2)优点:不需专门的灭菌设备,投资少,设备简单,灭菌效果好。 (3)缺点:在一个设备内完成加热、冷却过程,需时长,罐利用率低,培养基成分破坏较多。 中小型发酵罐、种子罐常采用此种方法。 (4)过程:升温、保温、降温三阶段 (5)设备:发酵罐、高压蒸汽灭菌锅 分批灭菌的操作 1、准备 2、预热 3、加热 4、保温 5、降温 2.连续灭菌(sterilization)法中的常用设备 1、优点: 2、分批灭菌与连续灭菌的异同点 : 相同点:升温、保温、降温三阶段 不同点: 分批灭菌:同一设备,时间错开, 连续灭菌:不同设备,空间错开。 连续灭菌的特点 : 1、升、降温度快 2、营养损失少 3、投资大 空罐灭菌 空罐灭菌也称空消。无论是种子罐、发酵罐、还是尿素(或液氨)罐、消泡罐,当培养基(或物料)尚未进罐前对罐进行预先灭菌,为空罐灭菌。 为了杀死所有微生物特别是耐热的的芽孢,空罐灭菌要求温度较高,灭菌时间较长,只有这样才能杀死设备中各死角残存的杂菌或芽孢。 连续灭菌流程 连续灭菌流程 1、缺点: (1)设备体积大,不能先进先出,培养基易受热不均匀,影响灭菌质量 (2)喷淋冷却管道长,如果培养基粘度大、固体微粒多易堵塞,热能利用不经济。 2 、优点:设备结构简单,操作方便,应用广泛。 喷射加热连续灭菌流程 喷射加热连续灭菌流程 1、流程 升温:喷射加热器,加热蒸汽高速喷出,借抽吸作用直接混和,加热至灭菌温度。 保温:管式维持器保温 降温:膨胀阀,真空闪急蒸发器,水分急速蒸发,瞬间冷却至70-80℃,到发酵罐冷却至发酵温度。 优点: (1) 加热、冷却过程短,营养成分破坏少 (2) 可先进先出 (3) 需设备自动控制装置 缺点:需出料泵或置于10米的高度(真空系统的密封问题),需设置自动控制装置,确保蒸汽压力、流量,进料流量的稳定。 板式换热器连续灭菌流程 板式换热器连续灭菌流程 1、特点:单位面积具有高传热面积,且可改变面积大小,拆洗维修方便。 2、优点:传热系数大,流程热利用合理,省蒸汽、水,同时完成预热、灭菌、冷却过程。 3、缺点: (1)流体通道较狭窄,若稠厚,流动阻力大; (2)板间叠合要严密。 1-1 连续灭菌 1、说出常用加热设备的工作原理 2、说出常用维持设备的工作原理 3、说出常用冷却设备的工作原理 一、加热设备 连消塔,分套管式和喷射式 1、套管式加热器(塔式加热器) 组成:多孔的蒸汽导入管+外套管 (1)孔径: 5-8mm.为防止蒸汽喷孔堵塞,孔径不宜太小 (2)孔数:决定于导管的直径,通常取小孔的总截面积=或<导入管的截面积 (3)夹角:小孔与管壁成45。夹角开设 (4)分布:小孔的分布上稀下密,以便蒸汽能均匀喷出 套管式加热器(塔式加热器) 操作: 1、待灭菌的料液从外管下部的侧面用泵打入,(泵的操作压力蒸气压力),经内外两管间的环隙内向上流动,流速为0.1m/s左右。蒸汽从塔上部通入蒸汽导入管,经小孔高速喷出,与料液激烈混和进行加热,到灭菌温度(110-130℃)维持15-20s的高温灭菌时间。 2、塔的有效高度2-3m,加热时间20-30s 3、缺点:小孔加工困难,设备高,有噪音,改用喷射式 4、优点:管上开孔,气体以鼓泡形式从小孔喷出,接触,传质、传热面积大 2、喷射式加热塔 1、结构:主要由两个圆筒组成,在每个圆筒的下端依次伸入一个套管式喷嘴,与底盖连接,并把两个圆筒连成塔形。喷嘴上方有圆形挡板。 2、工作原理:待灭菌的培养基由下端中心物料管导入,加热蒸汽从物料管外的环隙引入,成环形加热料液,使培养基与蒸汽在瞬间均匀混合并加热到灭菌温度,上升的培养液被圆形挡板阻挡,折转向四周后上升进入扩大管,随后经过第二次加热后由筒顶排出。 3、设圆形挡板的原因:蒸汽以高速(150m/s)冲出喷嘴与培养基瞬间混合均匀后,向上的速度仍十分大,而扩大管仅1m左右,料液很容易直接冲出加热器,影响混合效果。设有挡板后,蒸汽、培养基瞬间混合碰撞挡板后,折流在扩大
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