色谱分离基方程2-2.ppt

2. 色谱分离基本方程 对于常规分析工作，一般选用： 选择性系数α（相对保留值）与保留指数I来评价固定液 有效塔板数N有效来评价色谱柱与分离条件 以分离度R作为柱的总分离效能指标 （1）几个概念——选择性系数α 定义与相对保留值(ri,s)基本相同 不同之处在于:选择性系数是两个相邻峰的调整保留值之比（后峰比前峰，α≥1），而不是被测物与标准物质的调整保留值之比（可小于1） 它是评价固定液选择性的指标。选择性系数越大，该柱对此相邻峰的分离越好。 几个概念——有效塔板数N有效 在气相色谱中，通常用有效塔板数N有效和有效塔板高度H有效来评价柱子的分离效能，它扣除了死体积对分离的影响，更好地反映了柱子的实际分离效能。 柱效越高，该柱的分离能力越好。 几个概念——分离度R (2)色谱分离基本方程（Purnell方程） （3）色谱分离基本方程的启示 要改善物质对的分离（提高R），即提高两相邻物质的分离度，可以采取以下措施： 提高柱效N 提高选择性系数α 增大容量因子k N的影响，如何提高N？ 分离度R与理论塔板数N的平方根成正比关系，增加塔板数，有利于提高分离度。 增加柱长可增加N，改善分离，但分析时间将大大延长，峰产生扩展。 减小塔板高度H： 根据速率方程的启示制备一根性能优良的色谱柱是十分重要的。 根据速率方程选择合适的色谱条件同样有效。 K的影响，如何改变k？ 分离度与容量因子有关，容量因子越大，分离越好。 k 1 3 5 7 9 11 13 ∞ k/k+1 0.50 0.75 0.83 0.88 0.90 0.92 0.93 1.00 但当容量因子大于10，k/(k+1)的改变不大，而分析时间将大大延长。因此，k的最佳范围是1k10。 改变容量因子的方法有： 改变柱温 改变相比，即改变固定相的量和改变柱死体积，其中死体积对k/(k+1)的影响很大，使用死体积大的柱子，分离度将受到很大损失。 在高效液相色谱中改变流动相的配比是最简便、最有效的方法 α的影响，如何改变α？ α越大，分离效果越好。 增大α是提高分离度最有效的手段。 改变柱温也可改变α。 因此在气相色谱中，增大α最有效的手段是改变固定相，选择合适的固定相种类是解决分离问题的关键 在高效液相色谱中，流动相的种类和配比是改善分离最简便有效的方法。 （4）分离度究竟要多大？ 一般来说R应大于1.5。 具体工作中应根据样品要求和定量方法来确定。 例如：含量50%的组分，要使峰高定量误差小于1%，需达到R1/2=1.28，而采用峰面积定量R1/2需1.00。含量1%的组分，要使峰高定量误差小于1%，需达到R1/2=1.83，而采用峰面积定量R1/2需2.37。 3. 气相色谱操作条件的选择 流速 柱温 气化温度 检测器温度 进样量 载气种类 固定相种类 流速u（Fc） 根据速率方程，可计算求出最佳流速，此时柱效最高。在实际工作中，为缩短分析时间，往往使流速稍高于最佳流速。 具体的：对于填充柱，氮气的实用最佳线速为10-15cm/s；氢气为15-25cm/s；氦气介于两者之间。若填充柱内径为3mm，则体积流速为氮气15-25ml/min，氢气30-50ml/min。 柱温Tc 直接影响分析效能和分析速度。 每一种固定液都有它的最高使用温度，柱温不可超过这一温度，否则固定液挥发流失。 柱温太高，组分挥发度靠拢，不利于分离。但柱温太低，被测组分的扩散速度下降，分配不能快速达到平衡，影响峰型，柱效下降，并使分析时间大大延长。 柱温选择的原则是，在保证难分离物质有良好分离的前提下（分离度满足要求），可以采取较高柱温，以缩短分析时间，保证峰型对称。 具体的 混合物bp 柱温 固定液含量 300℃ 低于bp100-200℃ 1-3% 200-300℃ 低于bp100℃ 5-10% 100-200℃ 平均bp的2/3 10-15% 气体 室温 15-25% 吸附剂 沸程范围100 ℃ 程序升温 汽化温度 一般进样方法下，汽化温度比柱温高30-70℃。 进样量大时高一些好，保证瞬间汽化。 保证不可超