《常用培养基概念及配方.docVIP

LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。 PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。 MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。 乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等 自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。 自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO4 17 mg／L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／L+FeC13·6H2O 0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L． 一、LB培养基配制 1升LB培养培养基需：蛋白胨0g/L；酵母粉5 g10 g/L、单/双去离子水、琼脂15~20g/L（配制液体培养基不需要加，配制固体培养基时加入）。pH值用5mol/L NaOH溶液调至7.4（用精密21min。 二配制1）溶解酵母膏（yeast extract）10g/L蛋白胨（peptone）20g于中，如制平板加入20g琼脂粉 2）高压灭菌?121C 20min； 3 加入20g/L葡萄糖 (extrose或glucose葡糖糖溶液灭菌后加入防止与蛋白胨反应) 注：葡萄糖溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌，也可以11515min灭菌。 蛋白胨（peptone）/L、牛肉膏)10g/L、酵母菌粉(yeast extract)5g/L、醋酸钠（乙酸钠）5g/L、磷酸氢二钾/L、柠檬酸铵L、琼脂20g/L、吐温80 1ml/L、葡萄糖20g/L（因葡萄糖与蛋白胨发生反应因此需单独配制）、pH值用冰乙酸调至6.2~6.6（用pH试纸仪器 凝胶板大孔为,两小孔为 琼脂糖粉10g~12g/L，TBE0.5×（Tris硼酸是一种PCR技术中用到的缓冲液。成分及终浓度（5×） [最终pH=8.25或8.3]用蒸馏水稀释至×） 1）琼脂糖凝胶的制备：称取0.3g琼脂糖，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，将该三角瓶置于微波炉加热至琼脂糖溶解。将冷却至65左右的琼脂糖凝胶液，加入溴化乙锭凝胶染料，充分混匀。 胶板的制备： 取有机玻璃内槽，洗净、晾干；将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，安好挡板，放好梳子。吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其凝固，在距离底板0.5～1.0mm的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔。如果梳子距离玻璃板再近，则拔出梳子时孔底将有破裂的危险，破裂后将使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。凝胶的厚度在3～5mm之间，检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡室温下静置30min左右，待凝固完全后，轻轻拔出梳子，在胶板上即形成相互隔开的上样孔。制好胶后将铺胶的有机玻璃内槽放在含有0.5～1×TAE（Tris-乙酸） 或TBE（Tris-硼酸）工作液的电泳槽中使用，没过胶面1mm以上。 配制步骤：其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水