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大肠菌群类检测方法介绍 食品中大肠菌群类及其检验 ● 大肠菌群（coliforms）： ◆指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和 兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 ◆该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评 价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 大肠菌群类检测方法 粪大肠菌群检测的GB法 3M PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片的检测原理 大肠菌群及大肠杆菌3M Petrifilm 检测法 3M PetrifilmTM 大肠菌群测试片 含有改良的VRB培养基 目标菌落为红点带气泡 36 ?1?C , 24 ?2 h 培养时叠放片数小于20 计数范围15-150 AOAC官方方法 3MTM PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片 24 h得出大肠菌群数 肉、家禽和海鲜，24 h得出大肠杆菌数 其它食品，48 h得出大肠杆菌数 E. coli O157表现为大肠菌群 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗。 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。 滴加95%乙醇脱色约15~30s，直至颜色液被洗掉。不要过分脱色，水洗。 滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。 结果： 革兰氏阳性菌呈紫色 革兰氏阴性菌呈红色 IMVIC 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后，加Kovacs氏试剂0.2-0.3ml,上层出现红色为靛基质阳性反应。 MR-VP培养基： 在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取1ml至13×100mm试管中，加5%α-萘酚乙醇溶液0.6ml,40%氢氧化钾溶液0.2ml，和少许肌酸结晶，振摇试管后静置2h，出现伊红色为VP试验阳性。 将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5滴甲基红溶液。培养物变红则为甲基红试验阳性，变黄为阴性。 Kovacs氏枸橼酸盐肉汤：36±1℃培养96h后记录有无生长。 LST肉汤：于36±1℃培养48±2h，观察试管是否产气。 生化试验： 菌落挑取 三糖铁琼脂 蛋白胨水 半固体斜面 PH7.2尿素琼脂 KCN肉汤 赖氨酸脱羧酶试验培养基 克氏双糖铁琼脂 培养过夜 TSI底层产酸不产硫化氢， KCN阴性，尿素阴性 大肠杆菌 革兰氏阴性菌 * 大肠菌群(Coliform) 粪大肠菌群(Fecal Coliform) 大肠杆菌(E.coli) 肠杆菌科(Enterobactericeae) 肠杆菌科四种指标菌的范围 （隶属关系） ● 粪大肠菌群（Faecal coliform）： ◆系指一群在44.5℃培养24h~48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧 和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 ● 大肠杆菌（Escherichia coli）： ◆大肠杆菌广泛存在于是人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃ 发酵乳糖产酸产气、 IMViC生化试验为+ + - -或- + - -。 ◆包括：产肠毒素（ETEC）肠致病性（EPEC）肠侵袭性(EIEC) 肠出血性(EHEC) 主要菌型：O157:H7 GB SN 日本方法 VRB固体平板法 Deso固体平板法 显色培养基法 3M Petrifilm 测试片法 MPN Table 革兰氏染色 24±2h 44.5±0.5℃ 乳糖胆盐发酵管产气的培养物 EC肉汤 不产气 粪大肠菌群阴性 产气 EMB平板 18-24h 有典型菌落报告为阳性 36±1℃ back 44.5±0.5℃ IMVIC back 营养琼脂斜面18-24h back back back bac