真题答题(大题,须稍加整理)..doc

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在 聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 模板DNA经加热变性成单链后，温度降到50℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 (3)延伸 DNA模板－引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条新的DNA链。 循环数 变性 复性 延伸 第一次（预变性） 94°C，30s － － 30次 94℃，20s 52℃，20s 72℃，20s 最后一次（保温） 72℃，30s (2)琼脂糖凝胶电泳 DNA在电厂作用下，可以由电源的负极向正极泳动，泳动的速度与DNA片段的长度成负相关，与电压强度成正比，因此可以分离不同长度的DNA。在有DNA marker（不同已知碱基对大小的DNA片段的混合物）的条件下，由于不同碱基大小的DNA片段在琼脂糖凝胶上涌动的速度不同，因此电泳完毕后会出现在胶块的不同位置。通过将扩增出的DNA片段与已知的条带做比较，可以大概推测出该片段的碱基对的大小。如果要进一步检测其大小，可以换另外规格的DNA marker 继续电泳。核酸荧光染料可以与DNA嵌合，一起电泳，DNA图谱观察仪可以激发特定的蓝色光源，荧光染料在该光照射下可见到荧光，荧光的亮度与DNA大小成正比。 三、实验仪器及试剂 7种PCR组分 微量可调移液器 离心管 PCR仪 水平电泳槽 电泳仪电源 紫外分光光度计 250ml锥形瓶(封口膜) 记号笔 卫生纸 四、实验步骤 1、DNA体外扩增 (1) 将所有试剂管瞬时离心一次（4000r/min,1min），使管壁没有残留药品，在引物I 和引物II的离心管内用移液器各加入40ul双蒸水（ddH2O），混匀后瞬时离心一次。所有的离心管都摆到双面板上。 (2)向装有Taq DNA 聚合酶的离心管按下表加入以下成分： 10x Buffer 50 μL MgCl2 50 μL dNTP mixture 20μL 上游引物(引物I) 25μL 下游引物(引物II) 25 μL 模板DNA 25 μL ddH2O 290μL 原有的Taq DNA 聚合酶有15ul，此时混合液体系共计500ul,此步骤由第一、二组同学合作完成。（在实验老师的监督指导下操作，确保此后其他同学的实验顺利进行） (3)共分25组，第一、二组的同学并入其他小组进行实验。每组取20ul的上述混合液于0.5ml的离心管中，加入15ul的液体石蜡封闭体系，以防止在加热过程中蒸发。 (4) 对自己组的离心管上进行标记之后，放到PCR仪上进行DNA扩增。 2、琼脂糖凝胶电泳检测DNA （1）用蒸馏水将电泳槽和梳子冲洗干净，放在水平桌面上，并架好梳子。 （2）配制浓度为1%（1 g/100 mL）的琼脂糖凝胶。在锥形瓶中，称取的琼脂糖粉，加入，在微波炉内加热，使琼脂糖粉熔化，然后冷却至60 ℃，倒入电泳槽中，待其凝固。（3）小心移去梳子，注意不要破坏加样孔。向电泳槽中缓缓倒入电泳缓冲液，以没过胶面2 mm为宜。 （5（6）（6）接通电源电压为 V，电流最大。 （7）当指示剂移动到凝胶时，断开电源，终止电泳。 （8）电泳带及其位置，判断扩增产物的情况。 简答题 1. 氨基酸脱氨后产生的氨和α-酮酸有哪些主要的去路？ 答：氨基酸经脱氨基后所生成的氨进入血液，由丙氨酸及谷氨酰胺两种形式运输，大部分在肝中合成尿素，只有少部分在肾以铵盐形式由尿排出。氨基酸经脱氨基后所生成的α-酮酸可以进一步代谢，主要有三条代谢途径。 （1）经氨基化生成非必需氨基酸：哺乳类动物体内的一些非必需氨基酸一般通过α-酮酸氨基化而生成。 （2）转变成糖及脂类：α-酮酸可以转变为糖和脂肪。分别用各种不同的氨基酸喂养人工造成糖尿病的犬时发现，大多数氨基酸可使尿中葡萄糖的排出量增加，少数几种（异亮、苯丙、酪、苏及色氨酸）可使尿中葡萄糖和酮体的量都增加，而亮氨酸和赖氨酸只能使尿中酮体的排出量增加，因此将氨基酸分为三大类：生糖氨基酸、生酮氨基酸和生糖兼生酮氨基酸。 （3）氧化供能：α-酮酸在体内可通过三羧酸循环和生物氧化体系，彻底氧化为CO2和H2O，同时释放能量供生理活动的需要。 2氨在血液中是如何转运的？ .答：氨是有毒物质，各组织中产生的氨必须以无毒性的方式经血液运输到肝合成尿素或运到肾以铵盐的形