酶学概论3.pptVIP

第六节 酶催化反应动力学 ? 研究酶催化反应速率以及影响该速率的各种因素的科学。 研究的重要意义 理论上：为酶的结构与功能以及酶的催化反应机制 提供证据。 实践上：寻找最有利的酶促反应条件，了解酶在代 谢中的作用以及某些药物的作用机制等。 ? 一．单底物反应动力学 （一）底物浓度对酶反应速度的影响 酶反应速度与底物浓度的关系 （二）米氏方程的推导 1．前提 ①E+P→ES的速度极小，尤其是在反应处于初始阶段 时，故k-2可忽略不计。于是上述方程简化为： ②一般反应体系中，底物浓度远大于酶的浓度，故底物 消耗量可以忽略不计，即在反应某一阶段的[S]与[S0] 相等； ③a.平衡态假说：当反应进行到一定程度后，E和ES之 间建立起快速平衡，ES分解形成E+P不足以破坏这 一平衡 即： k1[E][S]=k-1[ES] 特点：可以解释一些实验事实，但无普遍适用性。 b.稳态假说：当反应进行到一定程度以后，ES的生成速 度与分解速度相等，因而其浓度改变很小，达到稳 态。 ? 酶反应过程中各种物质浓度的变化曲线 (虚线之间为稳态) 2．米氏方程的讨论 ①Km的意义： ②对Km的分析 a. Km是酶的特征常数，它可以表示酶同底物的亲和力 Km大，亲和力小 Km小，亲和力大 1/Km亦可表示酶同底物的亲和力 1/Km大，Km小，亲和力大 1/Km小，Km大，亲和力小 b.影响Km的因素： 酶作用的底物。 外部条件：pH、温度、离子强度等。 *Km是酶的特征常数，它是针对特定的反应与特定的反应条件而言的。不同的酶，具不同的Km值；同一种酶作用于不同的底物，具有不同的Km值；同一种酶，催化同一种底物反应，但反应条件不同，也具有不同的Km值。一般而言，Km只与酶的性质有关，而与酶的浓度无关。 ③Km的应用 a.鉴定酶：鉴别不同来源或相同来源但在不同发育状态 及不同生理状态下催化相同反应的酶是否属于同一种 酶； b.判断酶的最适底物：Km最小 c.判断酶的专一性以及研究酶的活性中心： d.判断不同来源的同一种酶催化同一底物的反应是否存 在有差别： e.计算一定速度下的底物浓度或一定底物浓度下的反应 速度。 f.了解酶的底物浓度在体内具有的浓度水平： 一般说来，作为酶的最适底物，其在体内的浓度水平应接近于它的Km值。如[S]体内Km，则vvmax,说明大部分的酶在体内是不起作用的，处于一种浪费的状态；反之，如[S]体内Km， v≈vmax,这种底物浓度就失去其生理意义，也不符合实际情况。 g.判断反应方向或趋势： 催化可逆反应的酶，对正逆两向的Km值常常是不同的。测定这些Km值的大小及细胞内正逆两向的底物浓度，可以大致推测该酶催化正逆两向反应的效率。这对于了解酶在细胞内的主要催化方向及生理功能具有重要意义。 h.推测代谢途径： 例如：某些生物体内，丙酮酸可转变成乳酸、乙酰辅 酶A和乙醛，分别由乳酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶和丙酮 酸脱羧酶催化，这三种酶催化丙酮酸转变成上述3种产 物时的Km值分别为1.7×10-5、1.3×10-3和 1.0×10-3. 结论：在体内，如果某一物质可以在几个不同酶的催 化下形成不同的产物，则当该物质的浓度较低时，Km 值小的反应占优势。 i.判断可逆抑制作用的抑制类型。 ④两组概念的区别： a.Km与Ks ⑴Km是ES分解速度与形成速度的比值，1/Km表示形成 ES趋势的大小； ⑵Ks为ES解离常数； ⑶当k2k1,k-1时，Km≈Ks。 b.Km与Km/ ⑤反应速度v0与底物浓度[S0]之间的关系 a.当[S0]Km， b.当[S0]Km， 利用酶测定底物的理论基础。 ⑥反应速度v0与酶浓度[E0]之间的关系 只有在尽可能短的时间内，[S0]才可能处于稳态，v0 和[E0]之间的关系才会是线性的。 当[S0]Km时： 酶活测定的理论基础。 ⑦酶的转换数Kcat 单位时间内每个酶分子将底物转换为产物的微摩尔 数称为酶的转换数(Kcat)。 当一个反应体系中所有的酶都被底物饱和时，酶促 反应速度最大，即