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蛋白质含量测定紫外发 蛋白质含量的测定
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蛋白质含量的测定 蛋白质浓度测定采用考马斯亮蓝染色法。这一方法基于考马斯亮蓝G-250在 一定浓度的乙醇及酸性溶液中为棕红色,当它与蛋自质结合后,变为蓝色。测定 方法非常简单,只要将蛋白质样品加到染料试剂中,通过测定595nm处光吸收的 增加量可知其…
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蛋白质含量的测定
蛋白质浓度测定采用考马斯亮蓝染色法。这一方法基于考马斯亮蓝G-250在
一定浓度的乙醇及酸性溶液中为棕红色,当它与蛋自质结合后,变为蓝色。测定
方法非常简单,只要将蛋白质样品加到染料试剂中,通过测定595nm处光吸收的
增加量可知其结合蛋白质的量。
考马斯亮蓝试剂的配制:
100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%(V/V)乙醇中,加入100mL 85%(V/V)
磷酸,用蒸馏水定容至1000mL,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V) 考马斯亮
蓝G-250,4.7%(V/V)乙醇,8.5%(V/V)磷酸。
测定方法:
取1.0mL样品液,加5.0mL上述考马斯亮蓝G-250溶液,室温静置2min,在
595nm下测吸光度。根据OD值,从牛血清蛋白含量标准曲线中得出蛋白含量。
表4-1 蛋白质标准曲线的建立方法
Table 4-1 Standard cure of protein
试管编
1
号
标准蛋
白溶液
1.0
蒸馏水
考马斯
亮蓝
G-250
OD595 0 0.130 0.199 0.260 0.310 0.367 0.432 0.436 0.492 0.542 0.542 5ml 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Concentration of protein(mg/ml)
图4-5 蛋白质标准曲线
Table 4-5 Standard cure of protein
其标准曲线回归方程为:y=0.0172+6.6164x,R2=0.9976
y为595mn的吸光度, x为牛血清白蛋白的浓度
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