马铃薯快速繁殖(实验结果)-精.docVIP

一．实验设计方案 实验序号 实验名称 实验时间 实验室 （一）实验目的 1、通过本次实验，进一步熟悉无菌操作技术； 2、熟悉马铃薯快繁培养基及试管薯诱导培养基的配置方法； 3、掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方； 4、了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为马铃薯脱毒种薯的生产提供必要的基础苗。 5、通过本次实验，使学生能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。 （二） 实验原理、实验流程或装置示意图 1、实验原理 马铃薯是高度杂合的，因此它们的种子后代不可能与原种完全相同。只有由无性繁殖产生的植株，在遗传上才能与其亲本植物完全相同，从而可使品种的特性代代相传； 短枝发生型是指外植体携带的带叶茎段，在适宜的培养环境中萌发，形成完整植株，再将其剪成带叶茎段，继代再成苗的繁殖方法。该方法与田间枝条的扦插繁殖方法类似，故又称为微型扦插。能一次成苗，遗传性状稳定，培养过程简单，移栽成活率高。许多花卉、葡萄、马铃薯等试管苗的繁殖常用此方法。 利用植物组织培养技术，在无菌条件下对外植体进行离体培养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法称为植物离体无性繁殖。 在黑暗环境的诱导下，马铃薯试管苗可以在试管薯诱导培养基中结出种薯，且悬于茎秆上。 马铃薯试管薯是利用茎尖分生组织脱毒技术，在组织培养条件下高倍扩繁脱毒试苗，进而诱导试管苗所形成的块茎。试管薯具有无病原、体积小、贮藏运输方便、能工厂化周年生 不论液体培养还是固体培养，大多数植物组织培养中所用的培养基都是由无机营养物、碳源、 维生素、生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成。 配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之达到最终的容积。最后调节pH值，高压灭菌，于是制成所需要的培养基。 如果没有培养基干粉，则可采用以下两种方法来配制： 一个是按照配方规定的数量分别称量出各种成分，分别使它们溶解于水，然后再将它们混合在一起。 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液（母液），贮存在2～4℃冰箱内，待配培养基时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。 母液的配制有两种方法： ①、配制成单一化合物母液。此法适合配制多种培养基都需要的同一种母液。 ②、配成几种不同化合物的混合母液。此法在大量配制同种培养基时省时省力。由于MS 培养基较为常用，故配制MS 培养基母液。 配好的母液应放在试剂瓶中贮存。 本实验采用后者配制母液。 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 培养基配方设计：（1）根据培养的目的选择一种培养基为基本培养基。 （2）确定培养基中各种激素的浓度及相对比例。本实验中马铃薯试管苗快速繁殖培养基为MS培养基。诱导培养基的配方如下： MS培养基+5mg/L 6-BA+8%蔗糖。 2、实验流程 （1）实验总体流程 （2）母液配制流程 （3）马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制流程 （三）实验设备及材料 1、实验设备 果酱瓶、500mL搪瓷杯、三角瓶、烧杯、容量瓶、玻璃棒、25mL量筒、1mL和5mL移液管、洗耳球、PH试纸、封口膜、扎口用棉线、药勺、称量纸、普通电子天平、酒精棉球、小块纱布、灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、超净工作台、冰箱、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉、记号笔。 2、药品和试剂 （1）母液配制： 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄基腺嘌呤）、浓盐酸、氢氧化钠、95%酒精、蒸馏水等。 （2）马铃薯快速繁殖培养基及诱导培养基的配制： 事先配好的MS基本培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH等。 （3）其他： 75% 酒精等。 3、实验材料 马铃薯脱毒苗 （四）实验方法步骤 1、MS培养基母液和常用试剂的配制 （1）大量元素母液的配制 MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外，剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 ? 2H20、MgSO4 ? 7H2O、KH2PO4几种无机盐来供应，它们可配在同一母液中（具体配制见下表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量→称量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。 注意： CaCl2 ? 2H20最后加入 母