2013年中考生物总复习重点精品课件：实验二_微生物的实验室培养.pptVIP

* 实验二 微生物的实验室培养 营养条件----培养基 人们按照微生物对营养物质的不同要求,配制出供其生长繁殖的营养基质. 培养基种类 培养基的成分 水 碳源 氮源 无机盐 生长因子 其他条件 配制培养基时还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质（生长因子）以及氧气的需求。 环境条件-----无菌技术----消毒 煮沸消毒法、巴氏消毒法。 化学试剂消毒法：用酒精擦拭双手、氯气消毒水源等。 紫外线消毒法：紫外线照射接种室、接种箱或超净工作台。 无菌技术----灼烧灭菌 将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属器具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底灭菌。 接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。 无菌技术----干热灭菌 将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃加热1～2小时可达到灭菌目的。能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属器具等。 无菌技术----高压蒸汽灭菌 将灭菌物品放置高压蒸汽灭菌锅中，一般保持压力为100KPa、温度121℃条件下，维持15～30分钟。 思考---选择合适方法消毒或灭菌 培养基和培养皿 玻棒、试管、烧瓶、吸管 实验者的双手 环境条件-----培养温度和时间 种类 条件 温度 天数 细菌 30～37度 1～2d 放线菌 25～28度 5～7d 真菌 25～28度 3～4d 纯化技术------菌落 菌落：微生物在固体培养基表面生长可形成菌落。 单菌落：一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。 获得单菌落就达到了纯化培养微生物的目的。 实验药品及器材 大肠杆菌菌液、液体培养基、固体培养基、酒精灯、70%酒精棉、高压灭菌锅、涂布器、接种环、恒温培养箱等。 配制培养基----液体培养基 计算 称量 溶化（不加琼脂） 调pH 灭菌 配制培养基----固体培养基 计算 称量 溶化（添加琼脂） 调pH 灭菌 倒平板（50℃） 纯化大肠杆菌----平板划线法 平板划线法是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以得到单菌落。 纯化大肠杆菌----稀释涂布法 稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。合适的稀释度菌液涂布后可在固体培养基上形成单菌落。 注意：取出涂布器时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器再灼烧灭菌。 培养 将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱中,培养12小时和24小时后,分别观察并记录结果。 实验四 微生物数量的测定 统计菌落数目估算样品中的活菌数量 当稀释度足够高时，平板上的一个菌落来源于菌液中的一个活菌。 在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养以保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。 合适的稀释度 测定土壤中细菌的数量，一般选用104、 105 和106倍的稀释液进行平板培养 实验方法 稀释涂布法 实验步骤 土壤取样。 配制一系列梯度稀释土壤溶液 涂布在固体培养基上，按照不同微生物培养温度和时间进行培养。 统计菌落：每个梯度应多涂几个平板，取其平均值。并设置空白对照。 估算每克样品中的菌株数： 统计结果常常用菌落数目。所测得的菌落数目一般小于实际菌液中的活菌数。 显微镜直接计数法：血球计数板法 统计结果：一般用活菌数表示。 滤膜法：测定饮用水中大肠杆菌的数目 已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红—美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈黑色。可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 实验结果及分析 *