實验四植物抗逆性的测定.docVIP

实验 植物抗逆性的测定（电导仪法） 一 实验目的 进一步理解和认识逆境胁迫对植物细胞膜透性的影响，了解电导法在植物逆境生理与抗性育种研究中的应用范围。 、实验原理 ??? 在正常生长状况下，植物细胞膜保持着良好的选择透性，而当植物组织受到逆境（例如干旱、低温、高温、盐渍等）伤害时，由于膜脂过氧化、膜蛋白变性及膜脂流动性改变，造成膜相变和膜结构破坏，使得细胞膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，以致植物细胞浸提液的电导率增大。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，胁迫强度越大，伤害越重，外渗越多，电导率的增加也越大。同时也与植物抗逆性的强弱有关，抗性越强，伤害越轻，外渗越少，电导率的增加也越小。所以，通过测定外渗液电导率的变化，就可以反映出细胞膜的伤害程度和所测材料抗逆性的大小。 、材料仪器 1. 材料： 各种植物叶片（如丁香、小麦等） 2. 仪器设备： 电导仪；天平；恒温箱；真空干燥器；抽气机；恒温水浴锅；烧杯；剪刀或打孔器；吸水纸；纱布等。、实验 1．容器的洗涤： 电导法对水和容器的洁净度要求严格，所用容器必须彻底清洗，再用去离子水冲净，倒置于洁净滤纸上备用。 2．试验材料的处理： 选取正常生长的小麦或其他植物相同部位叶片若干，剪下后，先用纱布拭净，分成2份，将其中一份放置50℃左右的恒温箱中处理30min进行逆境胁迫处理。另一份放置在室温下作对照。 3. 测定步骤 (1) 将处理组叶片与对照组叶片用去离子水冲洗2次，再用洁净滤纸吸净表面水分，各称取2g，然后剪成长约1cm小段放入小烧杯中（大小以够容电极为度），并用玻璃棒压住，在杯中准确加入蒸馏水20ml，浸没叶片。?将其放入真空干燥器中，用抽气机抽气7～8min以抽出细胞间隙中的空气；重新缓缓放入空气，水即被压入组织中而使叶片下沉。（注：材料为阔叶时，最好使用打孔器取材） ?(2) 将抽过气的小烧杯取出，放在实验桌上静置20min，然后用玻棒轻轻搅动叶片，在20～25℃恒温下，用电导仪分别测定处理组和对照组得电导值为T1和C1。 (3) 测过电导率之后，再放入100℃沸水浴中15min，以杀死植物组织，取出待其冷却至25℃时测其煮沸电导率，分别为T2和C2。 、实验结果 伤害率（%）计算式为： 式中 Lt——处理叶片的伤害率； Lck——对照叶片的伤害率。 在电导率测定中一般应用去离子水，若制备困难可用普通蒸馏水代替，但需要设一空白(蒸馏水作空白)，测定样品时同时测定空白电导值，计算时各电导值需减去相应的空白电导值。 、思考题 . 测定电导率时为何反复清洗仪器和样品? ‘ 实验植物组织水势的测定一、 ?验证植物组织水分移动方向由水势决定掌握小液流测组织水势的方法。 植物体内的生理生化活动与其水分状况密切相关，而植物组织的水势是表示植物水分状况的一个重要生理指标。目前，植物组织水势的测定主要有几种方法：小液流法、折射仪法、压力室法、热电偶湿度计法等。压力室法较适于测定枝条或叶柄导管的水势。热电偶湿度计法较适宜测定柔软叶片的水势，且精确度高，可在一定范围内重复测定叶片的水势，是较好的水势测定方法。小液流法具有操作简便、反应灵敏、结果可靠、费用低廉诸多优点，因而在我国目前的许多研究中，测定植物组织水势仍小液流法为主要方法之一，同时该法也是校验其它方法的一个基准方法。 二、原理 将植物组织分别放在一系列浓度递增的溶液中，当找到某一浓度的溶液与植物组织之间水分保持动态平衡时，这可认为此植物组织的水势等于该溶液的渗透势（溶质势）。因溶液的浓度是已知的，可以根据公式算出其渗透压取其负值，为溶液的渗透势（ψл），代表植物的水势（ψ）（water potential）。 三、仪器1. 材料：植物叶片马铃薯块茎等。仪器：试管、青霉素小瓶9个；打孔器；镊子；移液管；烧杯；毛细滴管；刀片。 2. 试剂：1mol·L－1CaCl2母液；甲烯蓝粉末。 四、步骤 1 系列CaCl2溶液浓度配制 1）取干燥洁净试管9个，贴上标签，编号，用1mol·L－1 CaCl2母液配成0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45mol·L－1浓度的CaCl2溶液，各管总量为10ml，并塞上塞子（防止浓度改变），作为甲组。 2）另取干燥洁净的小瓶9个，贴上标签，编号，标明0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.4、0.45mol·L－1浓度,分别从甲组取相应浓度CaCl2溶液2.5ml盛于小瓶中，作为乙组。 2 取样及测定 1）选取生长一致的叶片，用直径为0.5cm的打孔器钻取圆片，在玻璃皿内混匀，然后用镊子把圆片放进乙组小瓶中，每瓶放15～